Long-PGD-biomarkers bij orgaandonoren

Primaire transplantaatdisfunctie (PGD) is verantwoordelijk voor hoge vroege mortaliteit bij longgetransplanteerde patiënten.

grondgedachte

De evolutie van longtransplantatie kan worden bemoeilijkt door primaire transplantaatdisfunctie (PGD), een vorm van acute respiratory distress syndrome veroorzaakt door ischemie-reperfusiegerelateerde verschijnselen. PGD ​​komt voor in 15-50% van de gevallen en is verantwoordelijk voor een significante toename van de mortaliteit, de duur van de beademing en de duur van het verblijf op de intensive care. Het is ook een belangrijke risicofactor voor de ontwikkeling op middellange termijn van acute en langdurige afstoting, van bronchiolitis obliterans syndroom (BOS) - chronische afstoting - die de overleving van het transplantaat drastisch vermindert.

Oppervlakteactieve eiwitten die het secretoire eiwit van Clara-cellen (16-kd Clara-celeiwit-CC16) en oppervlakteactieve eiwitten -A (SP-A), -B (SP-B) en -D (SP-D) omvatten, worden herkend als markers van de doorlaatbaarheid van de alveolocapillaire barrière.

Op basis van deze bevindingen postuleren we dat de genexpressie van CC16, SP-A, -B en D veranderd is in longbiopten uitgevoerd bij donoren van patiënten die primaire transplantaatdisfunctie ontwikkelen na longtransplantatie in vergelijking met biopsieën uitgevoerd bij donoren van patiënten vrij van dit syndroom.

Deze studie zou daarom een ​​aanvullend middel kunnen zijn voor objectieve beoordeling van de longkwaliteit voorafgaand aan transplantatie.

Doelstellingen en doelstellingen

1. Beschrijf, in de orgaandonor, veranderingen in expressie van Clara Cell Protein (CC16), surfactant-geassocieerde eiwitten (A, B of D), pro- en anti-inflammatoire cytokines in circulerend bloed en longweefsel tijdens orgaanherstel.
2. Beschrijf de biologische en structurele veranderingen na de periode van koude ischemie.
3. Stel een correlatie vast tussen biomarkers bij de orgaandonor en het optreden van acute transplantaatdisfunctie bij de longontvanger.

Materiaal en methode

Inclusiecriteria

Alle longorgaandonorpatiënten die naar ons netwerk zijn verwezen en hun ontvangers zullen worden opgenomen na het verkrijgen van hun geïnformeerde toestemming.

Gegevensverzameling

In de donor registreren we demografische gegevens (leeftijd, geslacht), geschiedenis, doodsoorzaak, bloedgasmeting, thoraxfotoprotocol, bloedbiologische parameters, duur van hersendood indien van toepassing en hete ischemietijd indien van toepassing en protocol van bacteriologische analyses.

In de ontvanger registreren we de demografische gegevens (leeftijd, geslacht), indicatie van transplantatie, resultaten van rechterkatheterisatie uitgevoerd op pre-transplantatie, standaard intraoperatieve gegevens, immunosuppressie, bloedgas, thoraxröntgenfotoprotocol, vullingsbalans en bloedbiologisch parameters op 24, 48 en 72 uur. De ontklemmingstijden worden geregistreerd.

Patiënten worden de rest van hun leven automatisch opgevolgd. Iteratieve biopsieën worden in het eerste jaar uitgevoerd om mogelijke acute afstoting op te sporen. De gegevens worden meegenomen in ons onderzoek.

Biologische monsters

Bij de donor wordt vóór de perfusie van de bewaaroplossingen 18 cc perifeer bloed afgenomen (dry tube, 9 cc). 1 tube wordt bewaard bij -80°C., de andere wordt gecentrifugeerd (15 minuten, 10000/min, 20°C.) en vervolgens wordt het serum bewaard bij -80°C.

Onmiddellijk na longherstel wordt een longbiopsie (6 cm2) uitgevoerd aan de onderkwabben.

Een fragment wordt onmiddellijk in vloeibare stikstof geplaatst en bewaard bij -80°C. Een tweede fragment wordt 24 uur in formaline bewaard en vervolgens in paraffineblokken bewaard.

Voor implantatie, aan het einde van de conserveringsperiode, wordt een nieuwe longbiopsie uitgevoerd in de onderkwabben.

Biologische analyses

Histologisch onderzoek en gradatie

Longweefsels gefixeerd in formaline worden gekleurd met hematoxyline-eosine om longlaesies te verminderen [(1) neutrofielinfiltratie, (2) luchtwegepitheelcelbeschadiging, (3) interstitieel oedeem, (4) hyalinemembraan en (5) bloeding].

Ontsteking, apoptose en oppervlakteactieve eiwitten

O Tissue mRNA metingen: in real time Quantification PCR (RTQ-PCR)

O Weefselpeptidemetingen: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Behandeling van bloedmonsters en analyses: ELISA - MILLIPLEX

Eiwit-inflammatoire cytokines (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), intercellulaire adhesiemoleculen (ICAM-1, VCAM-1), apoptose (Bax, Bcl2, Caspases)

Evaluatie van apoptose: TUNEL - Immunohistochemie