Lunge-PGD-biomarkører hos organdonorer

Primær graftdysfunksjon (PGD) er ansvarlig for høy tidlig dødelighet hos lungetransplanterte pasienter.

Begrunnelse

Utviklingen av lungetransplantasjon kan være komplisert av primær graftdysfunksjon (PGD), en form for akutt respiratorisk distress-syndrom forårsaket av iskemi-reperfusjonsrelaterte fenomener. PGD ​​forekommer i 15-50 % av tilfellene og er ansvarlig for en betydelig økning i dødelighet, varighet av assistert ventilasjon og liggetid på intensiv. Det er også en viktig risikofaktor for mellomlang sikt utvikling av akutt og langvarig avstøtning, av bronchiolitis obliterans syndrom (BOS) - kronisk avstøtning - som drastisk reduserer overlevelsen av transplantatet.

Overflateaktive proteiner som omfatter det sekretoriske proteinet til Clara-celler (16-kd Clara-celleprotein-CC16) og overflateaktive proteiner -A (SP-A), -B (SP-B) og -D (SP-D) gjenkjennes som markører for permeabiliteten til den alveolokapillære barrieren.

Basert på disse funnene, postulerer vi at genuttrykket av CC16, SP-A, -B og D er endret i lungebiopsier utført hos donorer av pasienter som utvikler primær graftdysfunksjon etter lungetransplantasjon sammenlignet med de som utføres hos donorer til pasienter fri for dette syndromet.

Denne studien kan derfor være et komplementært middel for objektiv vurdering av lungekvalitet før transplantasjon.

Mål og målsetninger

1. Beskriv, hos organdonor, endringer i ekspresjon av Clara Cell Protein (CC16), surfaktantassosierte proteiner (A, B eller D), pro- og anti-inflammatoriske cytokiner i sirkulerende blod og lungevev under organgjenoppretting.
2. Beskriv de biologiske og strukturelle endringene etter perioden med kald iskemi.
3. Etablere en korrelasjon mellom biomarkører hos organdonor og forekomst av akutt graftdysfunksjon hos lungemottaker.

Materiale og metode

Inklusjonskriterier

Alle lungeorgandonorpasienter henvist til vårt nettverk og deres mottakere vil bli inkludert etter å ha innhentet deres informerte samtykke.

Datainnsamling

Hos giveren vil vi registrere demografiske data (alder, kjønn), historie, dødsårsak, blodgassmåling, røntgenprotokoll for thorax, biologiske parametre for blod, varighet av hjernedød hvis det er aktuelt og varm iskemi-tid hvis det er aktuelt og protokoll for bakteriologiske analyser.

I mottakeren vil vi registrere demografiske data (alder, kjønn), indikasjon på transplantasjon, resultater av høyre kateterisering utført på pre-transplantasjon, standard intraoperative data, immunsuppresjon, blodgass, røntgen protokoll, fyllingsbalanse og biologisk blod. parametere ved 24, 48 og 72 timer. Utspenningstidene registreres.

Pasientene følges automatisk opp resten av livet. Iterative biopsier utføres det første året for å oppdage mulig akutt avstøtning. Dataene vil bli inkludert i vår studie.

Biologiske prøver

Hos giveren, før perfusjon av konserveringsløsningene, tas 18 cc perifert blod (tørrrør, 9 cc). 1 rør vil bli lagret ved -80 ° C., det andre vil bli sentrifugert (15 minutter, 10000 / min, 20 ° C.) og deretter vil serumet lagres ved -80 ° C.

Umiddelbart etter lungegjenoppretting utføres en lungebiopsi (6 cm2) ved nedre fliker.

Et fragment vil umiddelbart bli plassert i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C. Et andre fragment blir lagret i formalin i 24 timer og deretter lagret i parafinblokker.

Før implantasjon, ved slutten av konserveringsperioden, utføres en ny lungebiopsi i nedre fliker.

Biologiske analyser

Histologisk undersøkelse og gradering

Lungevev fiksert i formalin farges med hematoksylin-eosin for å gradere lungelesjoner [(1) nøytrofil infiltrasjon, (2) luftveisepitelcelleskade, (3) interstitielt ødem, (4) hyalinmembran og (5) blødning].

Betennelse, apoptose og overflateaktive proteiner

O Vevs-mRNA-målinger: i sanntid kvantifiserings-PCR (RTQ-PCR)

O Vevspeptidmålinger: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Behandling av blodprøver og analyser: ELISA - MILLIPLEX

Proteininflammatoriske cytokiner (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), intercellulære adhesjonsmolekyler (ICAM-1, VCAM-1), apoptose (Bax, Bcl2, Caspases)

Evaluering av apoptose: TUNEL - Immunhistokjemi