Biomarkery PGD w płucach u dawców narządów

Pierwotna dysfunkcja przeszczepu (PGD) jest odpowiedzialna za wysoką wczesną śmiertelność u pacjentów po przeszczepieniu płuc.

Racjonalne uzasadnienie

Ewolucja transplantacji płuc może być skomplikowana przez pierwotną dysfunkcję przeszczepu (PGD), formę zespołu ostrej niewydolności oddechowej spowodowanej zjawiskami związanymi z niedokrwieniem i reperfuzją. PGD ​​występuje w 15-50% przypadków i jest odpowiedzialna za znaczny wzrost śmiertelności, wydłużenia czasu wentylacji wspomaganej oraz długości pobytu na oddziale intensywnej terapii. Jest również ważnym czynnikiem ryzyka średnioterminowego rozwoju ostrego i długotrwałego odrzucenia, zespołu zarostowego zapalenia oskrzelików (BOS) - chronicznego odrzucenia - co drastycznie zmniejsza przeżywalność przeszczepu.

Białka surfaktantu obejmujące białko wydzielnicze komórek Clara (16-kd Clara cell protein-CC16) oraz białka surfaktantu -A (SP-A), -B (SP-B) i -D (SP-D) są rozpoznawane jako markery przepuszczalność bariery pęcherzykowo-włośniczkowej.

Na podstawie tych ustaleń postulujemy, że ekspresja genów CC16, SP-A, -B i D jest zmieniona w biopsjach płuc wykonanych u dawców pacjentów, u których wystąpiła pierwotna dysfunkcja przeszczepu po przeszczepie płuc, w porównaniu z tymi wykonanymi u dawców pacjentów wolnych od ten syndrom.

Badanie to mogłoby zatem stanowić uzupełniający sposób obiektywnej oceny jakości płuc przed przeszczepem.

Cele i zadania

1. Opisać u dawcy narządu zmiany w ekspresji białka Clara Cell Protein (CC16), białek związanych z surfaktantem (A, B lub D), cytokin pro- i przeciwzapalnych w krążącej krwi i tkance płucnej podczas regeneracji narządu.
2. Opisz zmiany biologiczne i strukturalne po okresie zimnego niedokrwienia.
3. Ustal korelację między biomarkerami u dawcy narządu a występowaniem ostrej dysfunkcji przeszczepu u biorcy płuca.

Materiał i metoda

Kryteria przyjęcia

Wszyscy pacjenci będący dawcami narządów płucnych skierowani do naszej sieci oraz ich biorcy zostaną uwzględnieni po uzyskaniu ich świadomej zgody.

Gromadzenie danych

U dawcy zapiszemy dane demograficzne (wiek, płeć), historię, przyczynę zgonu, gazometrię, protokół prześwietlenia klatki piersiowej, parametry biologiczne krwi, czas trwania śmierci mózgowej, jeśli to właściwe i czas gorącego niedokrwienia, jeśli to właściwe, oraz protokół analizy bakteriologiczne.

U biorcy zapiszemy dane demograficzne (wiek, płeć), wskazanie do przeszczepu, wyniki prawostronnego cewnikowania wykonanego przed przeszczepem, standardowe dane śródoperacyjne, immunosupresję, gazometrię, protokół RTG klatki piersiowej, bilans wypełnienia i biologię krwi parametry w 24, 48 i 72 godz. Czasy opadania są rejestrowane.

Pacjenci są automatycznie monitorowani przez resztę życia. Powtarzające się biopsje są wykonywane w pierwszym roku w celu wykrycia możliwego ostrego odrzucenia. Dane zostaną uwzględnione w naszym badaniu.

Próbki biologiczne

Od dawcy przed perfuzją roztworów konserwujących pobiera się 18 cm3 krwi obwodowej (sucha probówka, 9 cm3). 1 probówka będzie przechowywana w temperaturze -80°C, druga będzie wirowana (15 minut, 10000 obr/min, 20°C), a następnie surowica będzie przechowywana w temperaturze -80°C.

Natychmiast po odzyskaniu płuc wykonuje się biopsję płuc (6 cm2) w dolnych płatach.

Fragment zostanie natychmiast umieszczony w ciekłym azocie i przechowywany w temperaturze -80°C. Drugi fragment przechowywany jest w formalinie przez 24 godziny, a następnie przechowywany w bloczkach parafinowych.

Przed implantacją, pod koniec okresu przechowywania, wykonywana jest nowa biopsja płuc w płatach dolnych.

Analizy biologiczne

Badanie histologiczne i gradacja

Tkanki płuc utrwalone w formalinie są barwione hematoksyliną-eozyną w celu stopniowania zmian w płucach [(1) naciek neutrofili, (2) uszkodzenie komórek nabłonka dróg oddechowych, (3) obrzęk śródmiąższowy, (4) błona szklista i (5) krwotok].

Zapalenie, apoptoza i białka powierzchniowo czynne

O Pomiary mRNA tkankowego: PCR ilościowy w czasie rzeczywistym (RTQ-PCR)

O Pomiary peptydów tkankowych: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Obróbka próbek krwi i analizy: ELISA - MILLIPLEX

Białkowe cytokiny zapalne (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), cząsteczki adhezji międzykomórkowej (ICAM-1, VCAM-1), apoptoza (Bax, Bcl2, kaspazy)

Ocena apoptozy: TUNEL - Immunohistochemia