Biomarqueurs du PGD pulmonaire chez les donneurs d'organes

Le dysfonctionnement primaire du greffon (DPI) est responsable d'une mortalité précoce élevée chez les patients transplantés pulmonaires.

Raisonnement

L'évolution de la transplantation pulmonaire peut être compliquée par un dysfonctionnement primaire du greffon (DPI), une forme de syndrome de détresse respiratoire aiguë causée par des phénomènes liés à l'ischémie-reperfusion. Le DPI survient dans 15 à 50 % des cas et est responsable d'une augmentation significative de la mortalité, de la durée de la ventilation assistée et de la durée de séjour en réanimation. C'est également un facteur de risque important pour le développement à moyen et à long terme du rejet aigu et à long terme, du syndrome de la bronchiolite oblitérante (BOS) - rejet chronique - qui réduit drastiquement la survie du greffon.

Les protéines tensioactives comprenant la protéine sécrétoire des cellules de Clara (16-kd Clara cell protein-CC16) et les protéines tensioactives -A (SP-A), -B (SP-B) et -D (SP-D) sont reconnues comme marqueurs de la perméabilité de la barrière alvéolocapillaire.

Sur la base de ces résultats, nous postulons que l'expression génique de CC16, SP-A, -B et D est altérée dans les biopsies pulmonaires réalisées chez des donneurs de patients développant un dysfonctionnement primaire du greffon après transplantation pulmonaire par rapport à celles réalisées chez des donneurs de patients indemnes de ce syndrome.

Cette étude pourrait donc être un moyen complémentaire d'évaluation objective de la qualité pulmonaire avant la transplantation.

Buts et objectifs

1. Décrire, chez le donneur d'organe, les modifications de l'expression de la protéine cellulaire de Clara (CC16), des protéines associées aux surfactants (A, B ou D), des cytokines pro- et anti-inflammatoires dans le sang circulant et les tissus pulmonaires pendant la récupération d'organe.
2. Décrire les changements biologiques et structurels après la période d'ischémie froide.
3. Établir une corrélation entre les biomarqueurs chez le donneur d'organe et la survenue d'un dysfonctionnement aigu du greffon chez le receveur pulmonaire.

Matériel et méthode

Critère d'intégration

Tous les patients donneurs d'organes pulmonaires référés à notre réseau et leurs receveurs seront inclus après avoir obtenu leur consentement éclairé.

Collecte de données

Chez le donneur, nous enregistrerons les données démographiques (âge, sexe), l'historique, la cause du décès, la mesure des gaz sanguins, le protocole de radiographie pulmonaire, les paramètres biologiques sanguins, la durée de la mort cérébrale le cas échéant et le temps d'ischémie chaude le cas échéant et le protocole de analyses bactériologiques.

Chez le receveur, nous enregistrerons les données démographiques (âge, sexe), l'indication de la transplantation, les résultats du cathétérisme droit effectué en pré-transplantation, les données peropératoires standard, l'immunosuppression, les gaz du sang, le protocole de radiographie pulmonaire, le bilan de remplissage et la biologie sanguine. paramètres à 24, 48 et 72h. Les temps de débridage sont enregistrés.

Les patients sont automatiquement suivis pour le reste de leur vie. Des biopsies itératives sont réalisées la première année pour détecter un éventuel rejet aigu. Les données seront incluses dans notre étude.

Échantillons biologiques

Chez le donneur, avant la perfusion des solutions de conservation, 18 cc de sang périphérique sont prélevés (tube sec, 9 cc). 1 tube sera conservé à -80°C, l'autre sera centrifugé (15 minutes, 10000/min, 20°C) puis le sérum sera conservé à -80°C.

Immédiatement après la récupération pulmonaire, une biopsie pulmonaire (6 cm2) est réalisée au niveau des lobes inférieurs.

Un fragment sera immédiatement placé dans de l'azote liquide et stocké à -80°C. Un deuxième fragment est stocké dans du formol pendant 24h puis stocké dans des blocs de paraffine.

Avant l'implantation, à la fin de la période de conservation, une nouvelle biopsie pulmonaire est réalisée dans les lobes inférieurs.

Analyses biologiques

Examen histologique et gradation

Les tissus pulmonaires fixés dans le formol sont colorés avec de l'hématoxyline-éosine pour graduer les lésions pulmonaires [(1) infiltration de neutrophiles, (2) lésions des cellules épithéliales des voies respiratoires, (3) œdème interstitiel, (4) membrane hyaline et (5) hémorragie].

Inflammation, apoptose et protéines tensioactives

O Mesures d'ARNm tissulaires : PCR de quantification en temps réel (RTQ-PCR)

O Mesures de peptides tissulaires : Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

o Traitement des prélèvements sanguins et analyses : ELISA - MILLIPLEX

Cytokines inflammatoires protéiques (TNF-alpha, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), molécules d'adhésion intercellulaire (ICAM-1, VCAM-1), apoptose (Bax, Bcl2, Caspases)

Evaluation de l'apoptose : TUNEL - Immunohistochimie