Biomarcatori PGD polmonari nei donatori di organi

La disfunzione primaria del trapianto (PGD) è responsabile di un'elevata mortalità precoce nei pazienti trapiantati di polmone.

Fondamento logico

L'evoluzione del trapianto di polmone può essere complicata dalla disfunzione primaria del trapianto (PGD), una forma di sindrome da distress respiratorio acuto causata da fenomeni correlati all'ischemia-riperfusione. La PGD si verifica nel 15-50% dei casi ed è responsabile di un aumento significativo della mortalità, della durata della ventilazione assistita e della degenza in terapia intensiva. È anche un importante fattore di rischio per lo sviluppo a medio termine del rigetto acuto ea lungo termine, della sindrome da bronchiolite obliterante (BOS) - rigetto cronico - che riduce drasticamente la sopravvivenza del trapianto.

Le proteine ​​tensioattive che comprendono la proteina secretoria delle cellule di Clara (16 kd proteina cellulare Clara-CC16) e le proteine ​​tensioattive -A (SP-A), -B (SP-B) e -D (SP-D) sono riconosciute come marcatori di la permeabilità della barriera alveolocapillare.

Sulla base di questi risultati, postuliamo che l'espressione genica di CC16, SP-A, -B e D sia alterata nelle biopsie polmonari eseguite in donatori di pazienti che sviluppano disfunzione primaria del trapianto dopo trapianto polmonare rispetto a quelle eseguite nei donatori di pazienti senza questa sindrome.

Questo studio potrebbe quindi essere un mezzo complementare di valutazione obiettiva della qualità del polmone prima del trapianto.

Finalità e obiettivi

1. Descrivere, nel donatore di organi, i cambiamenti nell'espressione di Clara Cell Protein (CC16), proteine ​​associate ai tensioattivi (A, B o D), citochine pro e antinfiammatorie nel sangue circolante e nel tessuto polmonare durante il recupero dell'organo.
2. Descrivere i cambiamenti biologici e strutturali dopo il periodo di ischemia fredda.
3. Stabilire una correlazione tra i biomarcatori nel donatore di organi e l'insorgenza di disfunzione acuta del trapianto nel ricevente polmonare.

Materiale e metodo

Criterio di inclusione

Tutti i pazienti donatori di organi polmonari indirizzati alla nostra rete e i loro riceventi saranno inclusi dopo aver ottenuto il loro consenso informato.

Raccolta dati

Nel donatore, registreremo i dati demografici (età, sesso), la storia, la causa della morte, la misurazione dei gas nel sangue, il protocollo radiografico del torace, i parametri biologici del sangue, la durata della morte cerebrale se appropriato e il tempo di ischemia calda se appropriato e il protocollo di analisi batteriologiche.

Nel destinatario, registreremo i dati demografici (età, sesso), indicazione del trapianto, risultati del cateterismo destro eseguito prima del trapianto, dati intraoperatori standard, immunosoppressione, emogas, protocollo radiografico del torace, equilibrio di riempimento e sangue biologico parametri a 24, 48 e 72 ore. I tempi di debloccaggio vengono registrati.

I pazienti vengono seguiti automaticamente per il resto della loro vita. Le biopsie iterative vengono eseguite nel primo anno per rilevare un possibile rigetto acuto. I dati saranno inclusi nel nostro studio.

Campioni biologici

Nel donatore, prima della perfusione delle soluzioni di conservazione, vengono prelevati 18 cc di sangue periferico (provetta asciutta, 9 cc). 1 provetta verrà conservata a -80°C., l'altra verrà centrifugata (15 minuti, 10000/min, 20°C.) e successivamente il siero verrà conservato a -80°C.

Immediatamente dopo il recupero del polmone, viene eseguita una biopsia polmonare (6 cm2) ai lobi inferiori.

Un frammento verrà immediatamente posto in azoto liquido e conservato a -80°C. Un secondo frammento viene conservato in formalina per 24h e poi conservato in blocchi di paraffina.

Prima dell'impianto, al termine del periodo di conservazione, viene eseguita una nuova biopsia polmonare nei lobi inferiori.

Analisi biologiche

Esame istologico e gradazione

I tessuti polmonari fissati in formalina sono colorati con ematossilina-eosina per sfumare le lesioni polmonari [(1) infiltrazione di neutrofili, (2) danno delle cellule epiteliali delle vie aeree, (3) edema interstiziale, (4) membrana ialina e (5) emorragia].

Infiammazione, apoptosi e proteine ​​surfattanti

O Misurazioni di mRNA tissutale: PCR di quantificazione in tempo reale (RTQ-PCR)

O Misurazione dei peptidi tissutali: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Trattamento di campioni di sangue e analisi: ELISA - MILLIPLEX

Citochine infiammatorie proteiche (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), molecole di adesione intercellulare (ICAM-1, VCAM-1), apoptosi (Bax, Bcl2, Caspases)

Valutazione dell'apoptosi: TUNEL - Immunoistochimica