Lungen-PGD-Biomarker bei Organspendern

Die primäre Transplantatdysfunktion (PGD) ist für eine hohe Frühsterblichkeit bei lungentransplantierten Patienten verantwortlich.

Begründung

Die Entwicklung der Lungentransplantation kann durch eine primäre Transplantatdysfunktion (PGD) erschwert werden, eine Form des akuten Atemnotsyndroms, das durch Ischämie-Reperfusions-bezogene Phänomene verursacht wird. Die PID tritt in 15-50 % der Fälle auf und ist für eine deutliche Erhöhung der Sterblichkeit, der Dauer der assistierten Beatmung und der Verweildauer auf der Intensivstation verantwortlich. Es ist auch ein wichtiger Risikofaktor für die mittelfristige Entwicklung einer akuten und langfristigen Abstoßung, des Bronchiolitis-Obliterans-Syndroms (BOS) – einer chronischen Abstoßung – die das Überleben des Transplantats drastisch reduziert.

Surfactant-Proteine, umfassend das sekretorische Protein von Clara-Zellen (16-kd Clara-Zellprotein-CC16) und Surfactant-Proteine ​​-A (SP-A), -B (SP-B) und -D (SP-D) werden als Marker von erkannt die Permeabilität der alveolokapillaren Barriere.

Basierend auf diesen Ergebnissen postulieren wir, dass die Genexpression von CC16, SP-A, -B und D in Lungenbiopsien verändert ist, die bei Spendern von Patienten durchgeführt werden, die nach einer Lungentransplantation eine primäre Transplantatdysfunktion entwickeln, im Vergleich zu denen, die bei Spendern von Patienten durchgeführt werden, die frei von sind dieses Syndrom.

Diese Studie könnte daher ein ergänzendes Mittel zur objektiven Beurteilung der Lungenqualität vor einer Transplantation sein.

Ziele und Aufgaben

1. Beschreiben Sie beim Organspender Veränderungen in der Expression von Clara-Zellprotein (CC16), Surfactant-assoziierten Proteinen (A, B oder D), pro- und entzündungshemmenden Zytokinen im zirkulierenden Blut und Lungengewebe während der Organgewinnung.
2. Beschreiben Sie die biologischen und strukturellen Veränderungen nach der Zeit der Kälteischämie.
3. Stellen Sie eine Korrelation zwischen Biomarkern beim Organspender und dem Auftreten einer akuten Transplantatdysfunktion beim Lungenempfänger her.

Material und Methode

Einschlusskriterien

Alle Lungenorganspender-Patienten, die an unser Netzwerk überwiesen werden, und ihre Empfänger werden nach Einholung ihrer informierten Zustimmung eingeschlossen.

Datensammlung

Beim Spender erfassen wir demografische Daten (Alter, Geschlecht), Anamnese, Todesursache, Blutgasmessung, Thorax-Röntgenprotokoll, blutbiologische Parameter, ggf. Dauer des Hirntodes und ggf. Hot-Ischämie-Zeit sowie Protokoll bakteriologische Analysen.

Beim Empfänger erfassen wir die demografischen Daten (Alter, Geschlecht), Transplantationsindikation, Ergebnisse der vor der Transplantation durchgeführten Rechtskatheterisierung, intraoperative Standarddaten, Immunsuppression, Blutgas, Thorax-Röntgenprotokoll, Füllungsbilanz und Blutbiologie Parameter bei 24, 48 und 72h. Die Entspannzeiten werden aufgezeichnet.

Die Patienten werden automatisch für den Rest ihres Lebens nachbeobachtet. Iterative Biopsien werden im ersten Jahr durchgeführt, um eine mögliche akute Abstoßung zu erkennen. Die Daten fließen in unsere Studie ein.

Biologische Proben

Dem Spender werden vor der Perfusion der Konservierungslösungen 18 cc peripheres Blut entnommen (Trockenröhrchen, 9 cc). 1 Röhrchen wird bei -80°C gelagert, das andere wird zentrifugiert (15 Minuten, 10000/min, 20°C) und dann wird das Serum bei -80°C gelagert.

Unmittelbar nach der Erholung der Lunge wird eine Lungenbiopsie (6 cm2) an den unteren Lappen durchgeführt.

Ein Fragment wird sofort in flüssigen Stickstoff gegeben und bei –80°C gelagert. Ein zweites Fragment wird 24 h in Formalin gelagert und dann in Paraffinblöcken gelagert.

Vor der Implantation wird am Ende der Konservierungsdauer eine erneute Lungenbiopsie in den Unterlappen durchgeführt.

Biologische Analysen

Histologische Untersuchung und Graduierung

In Formalin fixiertes Lungengewebe wird mit Hämatoxylin-Eosin gefärbt, um Lungenläsionen abzustufen [(1) Neutrophileninfiltration, (2) Atemwegsepithelzellschädigung, (3) interstitielles Ödem, (4) hyaline Membran und (5) Blutung].

Entzündung, Apoptose und Surfactant-Proteine

O Gewebe-mRNA-Messungen: Echtzeit-Quantifizierungs-PCR (RTQ-PCR)

O Gewebepeptidmessungen: Western Blot – ELISA – MILLIPLEX

O Behandlung von Blutproben und Analysen: ELISA - MILLIPLEX

Protein-entzündliche Zytokine (TNF-alpha, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), interzelluläre Adhäsionsmoleküle (ICAM-1, VCAM-1), Apoptose (Bax, Bcl2, Caspasen)

Auswertung der Apoptose: TUNEL - Immunhistochemistry