Lunge-PGD-biomarkører i organdonorer

Primær graftdysfunktion (PGD) er ansvarlig for høj tidlig dødelighed hos lungetransplanterede patienter.

Begrundelse

Udviklingen af ​​lungetransplantation kan kompliceres af primær graftdysfunktion (PGD), en form for akut respiratorisk distress-syndrom forårsaget af iskæmi-reperfusionsrelaterede fænomener. PGD ​​forekommer i 15-50 % af tilfældene og er ansvarlig for en betydelig stigning i dødelighed, varighed af assisteret ventilation og varighed af ophold på intensiv. Det er også en vigtig risikofaktor for den mellemlange udvikling af akut og langsigtet afstødning, af bronchiolitis obliterans syndrom (BOS) - kronisk afstødning - som drastisk reducerer transplantatets overlevelse.

Overfladeaktive proteiner, der omfatter det sekretoriske protein fra Clara-celler (16-kd Clara-celleprotein-CC16) og overfladeaktive proteiner -A (SP-A), -B (SP-B) og -D (SP-D) genkendes som markører for permeabiliteten af ​​den alveolokapillære barriere.

Baseret på disse fund postulerer vi, at genekspressionen af ​​CC16, SP-A, -B og D er ændret i lungebiopsier udført i donorer af patienter, der udvikler primær graftdysfunktion efter lungetransplantation sammenlignet med dem, der udføres hos donorer fra patienter fri for dette syndrom.

Denne undersøgelse kunne derfor være et komplementært middel til objektiv vurdering af lungekvalitet før transplantation.

Mål og mål

1. Beskriv i organdonoren ændringer i ekspression af Clara Cell Protein (CC16), overfladeaktive associerede proteiner (A, B eller D), pro- og anti-inflammatoriske cytokiner i cirkulerende blod og lungevæv under organgendannelse.
2. Beskriv de biologiske og strukturelle ændringer efter perioden med kold iskæmi.
3. Etablere en sammenhæng mellem biomarkører i organdonoren og forekomsten af ​​akut graftdysfunktion hos lungemodtageren.

Materiale og metode

Inklusionskriterier

Alle lungeorgandonorpatienter henvist til vores netværk og deres modtagere vil blive inkluderet efter at have indhentet deres informerede samtykke.

Dataindsamling

Hos donoren vil vi registrere demografiske data (alder, køn), historie, dødsårsag, blodgasmåling, røntgenprotokol for thorax, biologiske blodparametre, varighed af hjernedød, hvis det er relevant og varm iskæmi, hvis det er relevant, og protokol for bakteriologiske analyser.

I modtageren vil vi registrere de demografiske data (alder, køn), indikation af transplantation, resultater af højre kateterisering udført på præ-transplantation, standard intraoperative data, immunsuppression, Blodgas, thorax røntgenprotokol, påfyldningsbalance og blodbiologisk parametre ved 24, 48 og 72 timer. Afspændingstiderne registreres.

Patienterne følges automatisk op resten af ​​livet. Iterative biopsier udføres i det første år for at påvise mulig akut afstødning. Dataene vil indgå i vores undersøgelse.

Biologiske prøver

Hos donoren, før perfusionen af ​​konserveringsopløsningerne, tages 18 cc perifert blod (tørrør, 9 cc). 1 rør vil blive opbevaret ved -80 ° C., det andet vil blive centrifugeret (15 minutter, 10000 / min, 20 ° C.), og derefter vil serummet blive opbevaret ved -80 ° C.

Umiddelbart efter genopretning af lungerne udføres en lungebiopsi (6 cm2) ved de nedre lapper.

Et fragment vil straks blive anbragt i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C. Et andet fragment opbevares i formalin i 24 timer og opbevares derefter i paraffinblokke.

Før implantation, ved slutningen af ​​konserveringsperioden, udføres en ny lungebiopsi i de nedre lapper.

Biologiske analyser

Histologisk undersøgelse og graduering

Lungevæv fikseret i formalin farves med hæmatoxylin-eosin for at gradere lungelæsioner [(1) neutrofil infiltration, (2) luftvejsepitelcelleskade, (3) interstitielt ødem, (4) hyalinmembran og (5) blødning].

Inflammation, apoptose og overfladeaktive proteiner

O Vævs-mRNA-målinger: i realtid Kvantificerings-PCR (RTQ-PCR)

O Vævspeptidmålinger: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Behandling af blodprøver og analyser: ELISA - MILLIPLEX

Proteininflammatoriske cytokiner (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), intercellulære adhæsionsmolekyler (ICAM-1, VCAM-1), apoptose (Bax, Bcl2, Caspases)

Evaluering af apoptose: TUNEL - Immunhistokemi