Biomarkery plicního PGD u dárců orgánů

Primární dysfunkce štěpu (PGD) je zodpovědná za vysokou časnou mortalitu u pacientů po transplantaci plic.

Odůvodnění

Vývoj transplantace plic může být komplikován primární dysfunkcí štěpu (PGD), což je forma syndromu akutní respirační tísně způsobená jevy souvisejícími s ischemií a reperfuzí. PGD ​​se vyskytuje v 15–50 % případů a je zodpovědná za významný nárůst mortality, trvání asistované ventilace a délky pobytu v intenzivní péči. Je také důležitým rizikovým faktorem střednědobého rozvoje akutní a dlouhodobé rejekce, syndromu bronchiolitis obliterans (BOS) - chronické rejekce - která drasticky snižuje přežití štěpu.

Povrchově aktivní proteiny obsahující sekreční protein Clara buněk (16kd Clara cell protein-CC16) a povrchově aktivní proteiny -A (SP-A), -B (SP-B) a -D (SP-D) jsou rozpoznávány jako markery propustnost alveolokapilární bariéry.

Na základě těchto zjištění předpokládáme, že genová exprese CC16, SP-A, -B a D je změněna v plicních biopsiích provedených u dárců pacientů s primární dysfunkcí štěpu po transplantaci plic ve srovnání s těmi, které byly provedeny u dárců pacientů bez tento syndrom.

Tato studie by proto mohla být doplňkovým prostředkem objektivního hodnocení kvality plic před transplantací.

Cíle a záměry

1. Popište u dárce orgánu změny v expresi Clara Cell Protein (CC16), proteinů spojených s povrchově aktivní látkou (A, B nebo D), pro- a protizánětlivých cytokinů v cirkulující krvi a plicní tkáni během obnovy orgánu.
2. Popište biologické a strukturální změny po období studené ischemie.
3. Stanovte korelaci mezi biomarkery u dárce orgánu a výskytem akutní dysfunkce štěpu u příjemce plic.

Materiál a metoda

Kritéria pro zařazení

Všichni pacienti s dárci plicních orgánů doporučení do naší sítě a jejich příjemci budou zahrnuti po získání jejich informovaného souhlasu.

Sběr dat

U dárce zaznamenáme demografické údaje (věk, pohlaví), anamnézu, příčinu smrti, měření krevních plynů, protokol RTG hrudníku, biologické parametry krve, případně dobu trvání mozkové smrti a případně dobu horké ischemie a protokol bakteriologické rozbory.

U příjemce zaznamenáme demografické údaje (věk, pohlaví), indikaci transplantace, výsledky pravostranné katetrizace provedené před transplantací, standardní intraoperační údaje, imunosupresi, krevní plyny, protokol RTG hrudníku, bilanci plnění a biologické biologické parametry ve 24, 48 a 72h. Zaznamenávají se doby deklamace.

Pacienti jsou automaticky sledováni po zbytek života. V prvním roce se provádějí iterativní biopsie k detekci případné akutní rejekce. Data budou zahrnuta do naší studie.

Biologické vzorky

U dárce se před perfuzí konzervačních roztoků odebere 18 cm3 periferní krve (suchá zkumavka, 9 cm3). 1 zkumavka bude skladována při -80 °C, druhá bude odstředěna (15 minut, 10 000/min, 20 °C) a poté bude sérum skladováno při -80 °C.

Ihned po zotavení plic se provede plicní biopsie (6 cm2) v dolních lalocích.

Fragment bude okamžitě umístěn do kapalného dusíku a skladován při -80 °C. Druhý fragment je uložen ve formalínu na 24 hodin a poté uložen v parafinových blocích.

Před implantací, na konci konzervačního období, je provedena nová plicní biopsie v dolních lalocích.

Biologické rozbory

Histologické vyšetření a gradace

Plicní tkáně fixované ve formalínu jsou obarveny hematoxylinem-eosinem ke gradaci plicních lézí [(1) infiltrace neutrofilů, (2) poškození epiteliálních buněk dýchacích cest, (3) intersticiální edém, (4) hyalinní membrána a (5) krvácení].

Zánět, apoptóza a povrchově aktivní proteiny

O Měření tkáňové mRNA: v reálném čase kvantifikační PCR (RTQ-PCR)

O Měření tkáňových peptidů: Western Blot - ELISA - MILLIPLEX

O Zpracování vzorků krve a analýzy: ELISA - MILLIPLEX

Proteinové zánětlivé cytokiny (TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-1, IL33) (IL-10), intercelulární adhezní molekuly (ICAM-1, VCAM-1), apoptóza (Bax, Bcl2, kaspázy)

Hodnocení apoptózy: TUNEL - Imunohistochemie