Mätning av viral reservoar och immunfunktion hos HIV-1-infekterade patienter under antiretroviral terapi

Introduktion

Nuvarande antiretroviral terapi (ART) är mycket effektiv för att undertrycka plasmavirusbelastningen till under detektionsgränsen och för att återställa värdens immunitet, vilket förlänger överlevnaden av HIV-1-infekterade patienter anmärkningsvärt. Emellertid kommer HIV-1 att återgå till nivåerna före behandlingen inom veckor efter avbrott eller oregelbunden medicinering1,2. Anledningen till att HIV-1 inte skulle utrotas av kraftfull ART kan förklaras av att reservoaren av latent HIV-1 i vilande CD4 T-celler kommer att existera även långvarigt undertryckande av viralt plasma-RNA. Flera terapeutiska tillvägagångssätt som syftar till att förhindra eller fördröja virusåterhämtning efter behandlingsavbrott, vilket ger en efterbehandlingsremission eller funktionell bot av HIV-1, undersöks3. Denna studie är att mäta storleken på viral reservoar och HIV-1-specifik T-cellssvar hos HIV-1-infekterade patienter under ART för att hjälpa till att förstå mekanismen för HIV-1 persistens och sedan hjälpa till att fastställa en potentiell policy för funktionell bot.

Metoder Inskrivningskriterier

1. Bekräftade HIV-1-infekterade patienter under regelbunden uppföljning och får antiretroviral behandling
2. Män med 20-50 år

Exklusions kriterier

1. Allvarlig samsjuklighet
2. Uppenbar lever- eller njurfunktion
3. Får immunsuppressiv terapi

Varaktighet och frekvens Totalt 48 veckors uppföljning och laboratoriemätning var 8:e vecka

Laboratoriemätning Vi kommer att ta blodprovet från försökspersoner efter att de undertecknat det informerade samtycket. Cirka 30 ml blod kommer att tas och skickas för bestämning av viral reservoar och HIV-1-specifika T-cellsvar, var 8:e vecka, från baslinjen vid inskrivningen till slutet av 48 veckor.

HIV-1 Gag-specifika T-cellssvar Rekombinant HIV-1 Gag p24 (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) kommer att användas som HIV-1-antigen. PBMC (106) kommer att inkuberas med eller utan p24 i 24-brunnars plattor i 6 dagar. Frekvensen av T-celler med BrdU-inkorporering kommer att mätas med flödescytometri.

HIV-virusreservoarer

Nivåer och innehåll av HIV-virusreservoarer i det perifera blodet kommer att analyseras i CD4+ T-celler (den huvudsakliga celltypen som hyser HIV-reservoar) i två huvudkomponenter:

• Proviralt DNA
• Cellassocierade (CA) HIV-RNA Kvantifieringarna för både HIV-pvDNA och CA-RNA är baserade på det PCR-baserade kvantitativa systemet.

Proviral DNA-bedömning Blodproverna kommer att användas för att isolera CD4+ T-celler för cellulär DNA-extraktion.

Standardiserad alikvot mängd extraherat DNA används för att bestämma HIV-pvDNA-nivån genom PCR-baserad kvantitativ analys som riktar sig mot den konserverade regionen av HIV-genen. HIV-pvDNA-nivån kommer att presenteras som kopior per miljon CD4+ T-celler. Antalet ingående celler bestäms av en separat PCR som riktar in sig på humana endogena gen(er).

Cellassocierat (CA) HIV-RNA Totalt cellulärt RNA kommer att extraheras från CD4+ T-celler för att generera totalt komplementärt DNA (cDNA) genom omvänd transkription. cDNA:t används sedan för att bestämma CA HIV RNA-nivå genom PCR-baserad kvantitativ analys som riktar sig mot de konserverade sekvenserna av HIV vid ett utsett laboratorium av sponsor. CA RNA-nivån presenteras en skopi av endogena hushållningsgentranskript, vars kopieantal kommer att bestämmas oberoende av en separat PCR som riktar in sig på RNA-transkripten av hushållningsgenen.

Referens

1. Pinkevych M, et al. HIV-reaktivering från latens efterbehandlingsavbrott inträffar i genomsnitt var 5-8:e dag - implikationer för HIV-remission. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. Hydroxiureas roll för att förbättra den virologiska kontrollen som uppnås genom strukturerat behandlingsavbrott vid primär HIV-infektion: slutliga resultat från en randomiserad klinisk prövning (Pulse). J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42 192-202 (2006)
3. DavenportMP, et al. Funktionellt botemedel mot HIV: utmaningens omfattning. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)