Virusvarannon ja immuunitoiminnan mittaaminen HIV-1-tartunnan saaneilla potilailla, jotka saavat antiretroviraalista hoitoa

Johdanto

Nykyinen antiretroviraalinen hoito (ART) on erittäin tehokas estämään plasman viruskuormitus havaitsemisrajan alapuolelle ja palauttamaan isännän immuniteetti, mikä pidentää merkittävästi HIV-1-tartunnan saaneiden potilaiden eloonjäämistä. HIV-1 kuitenkin palautuu hoitoa edeltävälle tasolle viikkojen kuluessa keskeytyksestä tai epäsäännöllisestä lääkityksestä1,2. Syy siihen, miksi HIV-1:tä ei hävitettäisi tehokkaalla ART:lla, voidaan selittää sillä, että piilevän HIV-1:n säiliö lepäävissä CD4-T-soluissa on pysyvästi olemassa jopa plasman viruksen RNA:n pitkän aikavälin suppressiossa. Useita terapeuttisia lähestymistapoja, joilla pyritään estämään tai viivyttämään viruksen toipumista hoidon keskeyttämisen jälkeen, jotka saavat aikaan HIV-1:n hoidon jälkeisen remission tai toiminnallisen parantumisen, tutkitaan3. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on mitata virusvaraston kokoa ja HIV-1-spesifisiä T-soluvasteita HIV-1-tartunnan saaneilla potilailla ART:n aikana, jotta voidaan ymmärtää HIV-1:n pysyvyyden mekanismia ja auttaa sitten luomaan potentiaalinen toimintamalli toiminnalliselle parantumiselle.

Menetelmät Ilmoittautumiskriteerit

1. Vahvistetut HIV-1-tartunnan saaneet potilaat säännöllisen seurannan alla ja saavat antiretroviraalista hoitoa
2. 20-50 vuotiaat miehet

Poissulkemiskriteerit

1. Vakava rinnakkaissairaus
2. Ilmeinen maksan tai munuaisten toimintahäiriö
3. Immunosuppressiivisen hoidon saaminen

Kesto ja tiheys Yhteensä 48 viikkoa seurantaa ja laboratoriomittauksia 8 viikon välein

Laboratoriomittaus Otamme verinäytteen koehenkilöiltä, ​​kun he ovat allekirjoittaneet tietoisen suostumuksen. Noin 30 ml verta otetaan ja lähetetään virussäiliö- ja HIV-1-spesifisten T-soluvasteiden määrittämistä varten 8 viikon välein rekisteröinnin lähtötilanteesta 48 viikon loppuun.

HIV-1 Gag -spesifiset T-soluvasteet Rekombinantti-HIV-1 Gag p24:ää (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) käytetään HIV-1-antigeeninä. PBMC:tä (106) inkuboidaan p24:n kanssa tai ilman sitä 24-kuoppaisilla levyillä 6 päivää. BrdU:ta sisältävien T-solujen esiintymistiheys mitataan virtaussytometrialla.

HIV-virusvarastot

Ääreisveren HIV-virusvarastojen tasot ja pitoisuudet analysoidaan CD4+ T-soluissa (tärkeimmissä solutyypeissä, joissa HIV-varasto on) kahdessa pääkomponentissa:

• Proviraalinen DNA
• Soluihin liittyvät (CA) HIV-RNA:t Sekä HIV pvDNA:n että CA RNA:n kvantifiointi perustuu PCR-pohjaiseen kvantitatiiviseen järjestelmään.

Proviraalinen DNA-arviointi Verinäytteitä käytetään CD4+ T-solujen eristämiseen solujen DNA:n uuttamista varten.

Uutetun DNA:n standardoitua alikvoottimäärää käytetään HIV-pvDNA-tason määrittämiseen PCR-pohjaisella kvantitatiivisella määrityksellä, joka kohdistuu HIV-geenin konservoituneeseen alueeseen. HIV:n pvDNA-taso esitetään kopioina miljoonaa CD4+ T-solua kohden. Syötesolujen lukumäärä määritetään erillisellä PCR:llä, joka kohdistuu ihmisen endogeeniseen geeniin.

Soluihin liittyvä (CA) HIV-RNA Solujen kokonais-RNA uutetaan CD4+ T-soluista kokonaiskomplementaarisen DNA:n (cDNA) tuottamiseksi käänteistranskription avulla. cDNA:ta käytetään sitten CA HIV:n RNA-tason määrittämiseen PCR-pohjaisella kvantitatiivisella määrityksellä, joka kohdistuu HIV:n konservoituneisiin sekvensseihin sponsorin nimeämässä laboratoriossa. CA RNA -tasolla esitetään kopiot endogeenisista talonpitogeenitranskripteistä, joiden kopiomäärä määritetään itsenäisesti erillisellä PCR:llä, joka kohdistuu talonpitogeenin RNA-transkripteihin.

Viite

1. Pinkevych M, et ai. HIV:n uudelleenaktivoituminen latenssin jälkihoidon keskeytymisestä tapahtuu keskimäärin 5-8 päivän välein, mikä vaikuttaa HIV:n remissioon. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et ai. Hydroksiurean rooli virologisen kontrollin tehostamisessa, joka saavutetaan strukturoidulla hoidon keskeytyksellä primaarisessa HIV-infektiossa: satunnaistetun kliinisen tutkimuksen (Pulse) lopulliset tulokset. J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42,192-202(2006)
3. DavenportMP, et ai. HIV:n toiminnallinen parantaminen: haasteen laajuus. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)