Mesure du réservoir viral et de la fonction immunitaire chez les patients infectés par le VIH-1 sous traitement antirétroviral

Introduction

La thérapie antirétrovirale (TAR) actuelle est très efficace pour supprimer la charge virale plasmatique en dessous de la limite de détection et pour restaurer l'immunité de l'hôte, prolongeant ainsi remarquablement la survie des patients infectés par le VIH-1. Cependant, le VIH-1 retrouvera ses niveaux d'avant le traitement quelques semaines après une interruption ou une médication irrégulière1,2. La raison pour laquelle le VIH-1 ne serait pas éradiqué par un TAR puissant peut s’expliquer par le fait que le réservoir de VIH-1 latent dans les cellules T CD4 au repos existera de manière persistante, même dans la suppression à long terme de l’ARN viral plasmatique. Plusieurs approches thérapeutiques visant à prévenir ou à retarder le rebond viral après une interruption du traitement, produisant une rémission post-traitement ou une guérison fonctionnelle du VIH-1, sont à l'étude3. Cette étude vise à mesurer la taille du réservoir viral et la réponse des lymphocytes T spécifiques du VIH-1 chez les patients infectés par le VIH-1 pendant le TAR pour aider à comprendre le mécanisme de persistance du VIH-1, puis pour aider à établir une politique potentielle de guérison fonctionnelle.

Méthodes Critères d'inscription

1. Patients confirmés infectés par le VIH-1, suivis régulièrement et recevant un traitement antirétroviral
2. Hommes de 20 à 50 ans

Critère d'exclusion

1. Comorbidité grave
2. Dysfonctionnement hépatique ou rénal évident
3. Recevoir un traitement immunosuppresseur

Durée et fréquence Un total de 48 semaines de suivi et des mesures en laboratoire toutes les 8 semaines

Mesure en laboratoire Nous prélèverons l'échantillon de sang sur les sujets après avoir signé le consentement éclairé. Environ 30 ml de sang seront prélevés et envoyés pour la détermination du réservoir viral et des réponses des lymphocytes T spécifiques du VIH-1, toutes les 8 semaines, depuis le départ lors de l'inscription jusqu'à la fin des 48 semaines.

Réponses des lymphocytes T spécifiques Gag du VIH-1 Le Gag p24 recombinant du VIH-1 (5 ug/mL ; Research Diagnostics, Inc.) sera utilisé comme antigène du VIH-1. Les PBMC (106) seront incubées avec ou sans p24 dans des plats de 24 puits pendant 6 jours. La fréquence des lymphocytes T avec incorporation de BrdU sera mesurée par cytométrie en flux.

Réservoirs viraux du VIH

Les niveaux et le contenu des réservoirs viraux du VIH dans le sang périphérique seront analysés dans les cellules T CD4+ (le principal type de cellule hébergeant le réservoir du VIH) en 2 composants principaux :

• ADN proviral
• ARN du VIH associés aux cellules (CA) Les quantifications de l'ADNpv du VIH et de l'ARN CA sont basées sur le système quantitatif basé sur la PCR.

Évaluation de l'ADN proviral Les échantillons de sang seront utilisés pour isoler les lymphocytes T CD4+ pour l'extraction de l'ADN cellulaire.

Une quantité aliquote standardisée d'ADN extrait est utilisée pour déterminer le niveau d'ADNpv du VIH grâce à un test quantitatif basé sur la PCR ciblant la région conservée du gène du VIH. Le niveau d'ADNpv du VIH sera présenté en copies par million de cellules T CD4+. Le nombre de cellules d'entrée est déterminé par une PCR distincte ciblant le(s) gène(s) endogène(s) humain(s).

ARN du VIH associé aux cellules (CA) L'ARN cellulaire total sera extrait des cellules T CD4+ pour générer de l'ADN complémentaire total (ADNc) par transcription inverse. L'ADNc est ensuite utilisé pour déterminer le niveau d'ARN du VIH CA grâce à un test quantitatif basé sur la PCR qui cible les séquences conservées du VIH dans un laboratoire désigné par le sponsor. Le niveau d'ARN CA est présenté sous forme de copies de transcrits de gènes de maintien endogènes, dont le nombre de copies sera déterminé indépendamment par une PCR distincte ciblant les transcrits d'ARN du gène de maintien.

Référence

1. Pinkevych M, et al. La réactivation du VIH suite à une latence après l'interruption du traitement se produit en moyenne tous les 5 à 8 jours - implications pour la rémission du VIH. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. Le rôle de l'hydroxyurée dans l'amélioration du contrôle virologique obtenu grâce à une interruption structurée du traitement dans la primo-infection par le VIH : résultats finaux d'un essai clinique randomisé (Pulse). J. Acquérir. ImmunitaireDef. Syndr. 42 192-202 (2006)
3. DavenportMP, et al. Guérison fonctionnelle du VIH : l’ampleur du défi. Nature Rev Immunol 19 : 45 (2019)