Måling for viral reservoar og immunfunksjon hos HIV-1-infiserte pasienter under antiretroviral terapi

Introduksjon

Nåværende antiretroviral terapi (ART) er svært effektiv for å undertrykke viral belastning i plasma til under deteksjonsgrensen og for å gjenopprette vertens immunitet, og dermed forlenge overlevelsen til HIV-1-infiserte pasienter bemerkelsesverdig. Imidlertid vil HIV-1 gå tilbake til nivåer før behandling innen uker etter avbrudd eller uregelmessig medisinering1,2. Grunnen til at HIV-1 ikke ville bli utryddet av kraftig ART kan forklares med at reservoaret av latent HIV-1 i hvilende CD4 T-celler vil vedvarende eksistere selv langsiktig undertrykkelse av plasmaviralt RNA. Flere terapeutiske tilnærminger som tar sikte på å forhindre eller forsinke viral tilbakefall etter behandlingsavbrudd, som gir en etterbehandlingsremisjon eller funksjonell kur av HIV-1, blir undersøkt3. Denne studien skal måle størrelsen på viralt reservoar og HIV-1-spesifikk T-cellerespons hos HIV-1-infiserte pasienter under ART for å hjelpe til med å forstå mekanismen for HIV-1 persistens, og deretter bidra til å etablere en potensiell policy for funksjonell kur.

Metoder Påmeldingskriterier

1. Bekreftede HIV-1-infiserte pasienter under regelmessig oppfølging og mottar antiretroviral behandling
2. Menn med 20-50 år

Eksklusjonskriterier

1. Alvorlig komorbiditet
2. Åpenbar nedsatt lever- eller nyrefunksjon
3. Mottar immunsuppressiv terapi

Varighet og frekvens Totalt 48 uker med oppfølging, og laboratoriemåling hver 8. uke

Laboratoriemåling Vi vil ta blodprøver fra forsøkspersoner etter at de har underskrevet det informerte samtykket. Omtrent 30 ml blod vil bli tatt og sendt for bestemmelse av viralt reservoar og HIV-1-spesifikke T-celleresponser, hver 8. uke, fra baseline ved registrering til slutten av 48 uker.

HIV-1 Gag-spesifikke T-celleresponser Rekombinant HIV-1 Gag p24 (5 ug/mL; Research Diagnostics, Inc.) vil bli brukt som HIV-1-antigen. PBMC (106) vil bli inkubert med eller uten p24 i 24-brønners plater i 6 dager. Frekvensen av T-celler med BrdU-inkorporering vil bli målt ved flowcytometri.

HIV-virusreservoarer

Nivåer og innhold av HIV-virale reservoarer i det perifere blodet vil bli analysert i CD4+ T-celler (den viktigste celletypen som inneholder HIV-reservoar) i 2 hovedkomponenter:

• Proviralt DNA
• Celleassosierte (CA) HIV RNAer Kvantifiseringene for både HIV pvDNA og CA RNA er basert på det PCR-baserte kvantitative systemet.

Proviral DNA-vurdering Blodprøvene vil bli brukt til å isolere CD4+ T-celler for cellulær DNA-ekstraksjon.

Standardisert alikvot mengde ekstrahert DNA brukes til å bestemme HIV pvDNA-nivået gjennom PCR-basert kvantitativ analyse rettet mot den konserverte regionen av HIV-genet. HIV pvDNA-nivået vil bli presentert som kopier per million CD4+ T-celler. Inndatacellenummeret bestemmes av en separat PCR rettet mot humant endogene gen(er).

Celleassosiert (CA) HIV RNA Totalt cellulært RNA vil bli ekstrahert fra CD4+ T-celler for å generere totalt komplementært DNA (cDNA) gjennom revers transkripsjon. cDNA brukes deretter til å bestemme CA HIV RNA-nivå gjennom PCR-basert kvantitativ analyse som retter seg mot de konserverte sekvensene av HIV ved et utpekt laboratorium av sponsor. CA RNA-nivået presenteres en skopi av endogene husholdningsgentranskripsjoner, hvis kopiantall vil bli bestemt uavhengig av en separat PCR rettet mot RNA-transkriptene til husholdningsgenet.

Henvisning

1. Pinkevych M, et al. HIV-reaktivering fra latens etterbehandlingsavbrudd skjer i gjennomsnitt hver 5.-8. dag - implikasjoner for HIV-remisjon. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. Hydroksyureas rolle i å forbedre den virologiske kontrollen oppnådd gjennom strukturert behandlingsavbrudd ved primær HIV-infeksjon: endelige resultater fra en randomisert klinisk studie (Pulse). J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42 192-202 (2006)
3. DavenportMP, et al. Funksjonell kur mot HIV: omfanget av utfordringen. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)