A vírusrezervoár és az immunfunkció mérése HIV-1-fertőzött betegeknél antiretrovirális terápia alatt

Bevezetés

A jelenlegi antiretrovirális terápia (ART) rendkívül hatékonyan csökkenti a plazma vírusterhelését a kimutatási határ alá, és helyreállítja a gazdaszervezet immunitását, ezáltal jelentősen meghosszabbítja a HIV-1-fertőzött betegek túlélését. A HIV-1 azonban a kezelés megszakítását vagy szabálytalan gyógyszeres kezelését követő heteken belül visszaáll a kezelés előtti szintre1,2. Az ok, amiért a HIV-1-et nem lehetne felszámolni erős ART-vel, azzal magyarázható, hogy a nyugvó CD4 T-sejtekben a látens HIV-1 tárolója még a plazma vírus RNS hosszú távú szuppressziója esetén is tartósan fennáll. Számos olyan terápiás megközelítést vizsgálnak, amelyek a kezelés megszakítása utáni vírusrebound megelőzését vagy késleltetését célozzák, és a kezelés utáni remissziót vagy a HIV-1 funkcionális gyógyulását eredményezik3. Ez a tanulmány a vírusrezervoár méretét és a HIV-1-specifikus T-sejt-választ méri HIV-1-fertőzött betegeknél az ART során, hogy segítsen megérteni a HIV-1 perzisztenciájának mechanizmusát, majd elősegítse a funkcionális gyógyulás lehetséges irányelveinek kialakítását.

Módszerek Beiratkozási feltételek

1. Rendszeres megfigyelés alatt álló, antiretrovirális kezelésben részesülő, igazolt HIV-1-fertőzött betegek
2. 20-50 éves férfiak

Kizárási kritériumok

1. Súlyos társbetegség
2. Nyilvánvaló máj- vagy veseelégtelenség
3. Immunszuppresszív terápia fogadása

Időtartam és gyakoriság Összesen 48 hetes utánkövetés, és 8 hetente laboratóriumi mérés

Laboratóriumi mérés Vérmintát veszünk az alanyoktól, miután aláírták a beleegyezésüket. Körülbelül 30 ml vért vesznek és küldenek el a vírusrezervoár és a HIV-1-specifikus T-sejtes válaszok meghatározására, 8 hetente, a beiratkozási alapvonaltól a 48. hét végéig.

HIV-1 Gag-specifikus T-sejtes válaszok HIV-1 antigénként rekombináns HIV-1 Gag p24-et (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) használunk. A PBMC-t (106) p24-gyel vagy anélkül inkubáljuk 24 lyukú lemezeken 6 napig. A BrdU-beépült T-sejtek gyakoriságát áramlási citometriával mérjük.

HIV vírustárolók

A perifériás vérben lévő HIV vírustartályok szintjét és tartalmát CD4+ T-sejtekben (a HIV-tartályt hordozó fő sejttípusban) két fő komponensben elemzik:

• Provirális DNS
• Sejt-asszociált (CA) HIV RNS-ek Mind a HIV pvDNS, mind a CA RNS mennyiségi meghatározása a PCR alapú kvantitatív rendszeren alapul.

Provirális DNS-értékelés A vérmintákat CD4+ T-sejtek izolálására használjuk fel sejtes DNS-kivonás céljából.

A kivont DNS standardizált alikvot mennyiségét a HIV pvDNS szintjének meghatározására használják PCR-alapú kvantitatív vizsgálattal, amely a HIV gén konzervált régióját célozza meg. A HIV pvDNS-szintje millió CD4+ T-sejtenkénti kópiában jelenik meg. A bevitt sejtszámot külön PCR határozza meg, amely humán endogén gén(eke)t célozza meg.

Sejt-asszociált (CA) HIV RNS A CD4+ T-sejtekből teljes sejt-RNS-t vonnak ki, hogy fordított transzkripcióval összkomplementer DNS-t (cDNS) hozzunk létre. A cDNS-t ezután a CA HIV RNS szintjének meghatározására használják PCR-alapú kvantitatív vizsgálattal, amely a HIV konzervált szekvenciáit célozza meg a szponzor által kijelölt laboratóriumban. A CA RNS szintet endogén house-keeping gén átiratok kópiái mutatják be, amelyek kópiaszámát egymástól függetlenül, a house-keeping gén RNS-transzkriptumait célzó PCR-rel határozzuk meg.

Referencia

1. Pinkevych M és mtsai. A lappangó utókezelés megszakítása miatti HIV reaktiváció átlagosan 5-8 naponként következik be, ami a HIV remisszióját jelenti. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT és mtsai. A hidroxi-karbamid szerepe a strukturált kezelés megszakításával elért virológiai kontroll fokozásában az elsődleges HIV-fertőzésben: egy randomizált klinikai vizsgálat (Pulse) végső eredményei. J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42,192-202(2006)
3. DavenportMP és mtsai. A HIV funkcionális gyógyítása: a kihívás nagysága. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)