Pomiar rezerwuaru wirusa i funkcji układu odpornościowego u pacjentów zakażonych HIV-1 poddawanych terapii przeciwretrowirusowej

Wstęp

Obecna terapia przeciwretrowirusowa (ART) jest wysoce skuteczna w zmniejszaniu miana wirusa w osoczu poniżej granicy wykrywalności i przywracaniu odporności gospodarza, a tym samym w znaczący sposób przedłuża przeżycie pacjentów zakażonych HIV-1. Jednakże poziom wirusa HIV-1 powróci do poziomu sprzed leczenia w ciągu kilku tygodni od przerwy lub nieregularnego leczenia1,2. Powód, dla którego HIV-1 nie zostałby wyeliminowany przez potężną ART, można wyjaśnić tym, że rezerwuar utajonego HIV-1 w spoczynkowych limfocytach T CD4 będzie stale istniał, nawet przy długotrwałej supresji wirusowego RNA w osoczu. Badanych jest kilka podejść terapeutycznych, których celem jest zapobieganie lub opóźnianie nawrotu wirusa po przerwaniu leczenia, powodujące remisję po leczeniu lub funkcjonalne wyleczenie wirusa HIV-13. Celem tego badania jest zmierzenie wielkości rezerwuaru wirusa i odpowiedzi limfocytów T specyficznych dla HIV-1 u pacjentów zakażonych HIV-1 podczas ART, aby pomóc w zrozumieniu mechanizmu utrzymywania się wirusa HIV-1, a następnie pomóc w ustaleniu potencjalnej polityki wyleczenia funkcjonalnego.

Metody Kryteria rekrutacji

1. Potwierdzeni pacjenci zakażeni wirusem HIV-1 podlegający regularnej obserwacji i otrzymujący terapię przeciwretrowirusową
2. Mężczyźni w wieku 20-50 lat

Kryteria wyłączenia

1. Poważna choroba współistniejąca
2. Wyraźna dysfunkcja wątroby lub nerek
3. Otrzymywanie terapii immunosupresyjnej

Czas trwania i częstotliwość Łącznie 48 tygodni obserwacji i pomiarów laboratoryjnych co 8 tygodni

Pomiary laboratoryjne Pobierzemy próbkę krwi od pacjentów po podpisaniu przez nich świadomej zgody. Pobierane będzie około 30 ml krwi i wysyłane w celu określenia rezerwuaru wirusa i odpowiedzi limfocytów T specyficznych dla wirusa HIV-1 co 8 tygodni, od wartości początkowej w momencie włączenia do badania do końca 48 tygodni.

Odpowiedzi komórek T specyficzne dla Gag HIV-1 Rekombinowany Gag HIV-1 p24 (5 µg/ml; Research Diagnostics, Inc.) będzie stosowany jako antygen HIV-1. PBMC (106) będą inkubowane z lub bez p24 na 24-studzienkowych płytkach przez 6 dni. Częstotliwość komórek T z inkorporacją BrdU będzie mierzona za pomocą cytometrii przepływowej.

Rezerwuary wirusa HIV

Poziomy i zawartość rezerwuarów wirusa HIV we krwi obwodowej będą analizowane w limfocytach T CD4+ (główny typ komórek niosących rezerwuar wirusa HIV) w 2 głównych składnikach:

• Prowirusowe DNA
• Związane z komórkami (CA) RNA HIV Oznaczenia ilościowe zarówno pvDNA HIV, jak i RNA CA opierają się na systemie ilościowym opartym na PCR.

Ocena prowirusowego DNA Próbki krwi zostaną użyte do izolacji limfocytów T CD4+ w celu ekstrakcji komórkowego DNA.

Standaryzowaną porcję wyekstrahowanego DNA stosuje się do określenia poziomu pvDNA wirusa HIV za pomocą testu ilościowego opartego na PCR, ukierunkowanego na konserwatywny region genu HIV. Poziom pvDNA wirusa HIV zostanie przedstawiony jako kopie na milion limfocytów T CD4+. Liczbę komórek wejściowych określa się w oddzielnej reakcji PCR ukierunkowanej na ludzki(e) endogenny(e) gen(y).

Związany z komórką (CA) HIV RNA Całkowity RNA komórkowy zostanie wyekstrahowany z limfocytów T CD4+ w celu wytworzenia całkowitego komplementarnego DNA (cDNA) poprzez odwrotną transkrypcję. cDNA wykorzystuje się następnie do określenia poziomu RNA wirusa CA HIV za pomocą testu ilościowego opartego na PCR, ukierunkowanego na konserwatywne sekwencje wirusa HIV w laboratorium wyznaczonym przez sponsora. Poziom CA RNA przedstawiono na podstawie kopii endogennych transkryptów genu metabolizmu podstawowego, których liczba kopii zostanie określona niezależnie w oddzielnej reakcji PCR ukierunkowanej na transkrypty RNA genu metabolizmu podstawowego.

Odniesienie

1. Pinkevych M i in. Reaktywacja wirusa HIV w wyniku przerwania leczenia w okresie latencji następuje średnio co 5-8 dni i ma wpływ na remisję wirusa HIV. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT i in. Rola hydroksymocznika we wzmacnianiu kontroli wirusologicznej osiągniętej poprzez ustrukturyzowane przerwanie leczenia w przypadku pierwotnego zakażenia wirusem HIV: końcowe wyniki randomizowanego badania klinicznego (Pulse). J. Nabyć. OdpornośćDef. Syndr. 42,192-202 (2006)
3. DavenportMP i in. Funkcjonalne lekarstwo na HIV: skala wyzwania. Natura Rev Immunol 19: 45 (2019)