Medición del reservorio viral y la función inmune en pacientes infectados por VIH-1 bajo terapia antirretroviral

Introducción

La terapia antirretroviral (TAR) actual es muy eficaz para suprimir la carga viral plasmática por debajo del límite de detección y restaurar la inmunidad del huésped, prolongando así notablemente la supervivencia de los pacientes infectados por VIH-1. Sin embargo, el VIH-1 volverá a los niveles previos al tratamiento pocas semanas después de la interrupción o la medicación irregular1,2. La razón por la cual el VIH-1 no sería erradicado por un potente TAR puede explicarse por el hecho de que el reservorio de VIH-1 latente en las células T CD4 en reposo existirá persistentemente incluso con una supresión a largo plazo del ARN viral plasmático. Se están investigando varios enfoques terapéuticos que tienen como objetivo prevenir o retrasar el rebote viral después de la interrupción del tratamiento, produciendo una remisión post-tratamiento o una cura funcional del VIH-13. Este estudio tiene como objetivo medir el tamaño del reservorio viral y la respuesta de las células T específicas del VIH-1 en pacientes infectados por el VIH-1 durante el TAR para ayudar a comprender el mecanismo de persistencia del VIH-1 y luego ayudar a establecer una política potencial para la cura funcional.

Métodos Criterios de inscripción

1. Pacientes infectados por VIH-1 confirmados bajo seguimiento regular y que reciben terapia antirretroviral
2. Hombres entre 20 y 50 años.

Criterio de exclusión

1. Comorbilidad grave
2. Disfunción hepática o renal evidente
3. Recibir terapia inmunosupresora

Duración y frecuencia Un total de 48 semanas de seguimiento y mediciones de laboratorio cada 8 semanas.

Medición de laboratorio Extraeremos la muestra de sangre de los sujetos después de que firmen el consentimiento informado. Se extraerán y enviarán aproximadamente 30 ml de sangre para determinar el reservorio viral y las respuestas de las células T específicas del VIH-1, cada 8 semanas, desde el inicio en el momento de la inscripción hasta el final de las 48 semanas.

Respuestas de células T específicas de Gag al VIH-1 Se utilizará Gag p24 del VIH-1 recombinante (5 ug/mL; Research Diagnostics, Inc.) como antígeno del VIH-1. Se incubarán PBMC (106) con o sin p24 en placas de 24 pocillos durante 6 días. La frecuencia de células T con incorporación de BrdU se medirá mediante citometría de flujo.

Reservorios virales del VIH

Los niveles y contenidos de los reservorios virales del VIH en la sangre periférica se analizarán en células T CD4+ (el principal tipo de célula que alberga el reservorio del VIH) en 2 componentes principales:

• ADN proviral
• ARN del VIH asociado a células (CA) Las cuantificaciones tanto del ADNpv del VIH como del ARN de CA se basan en el sistema cuantitativo basado en PCR.

Evaluación de ADN proviral Las muestras de sangre se utilizarán para aislar células T CD4 + para la extracción de ADN celular.

Se utiliza una cantidad alícuota estandarizada de ADN extraído para determinar el nivel de pvDNA del VIH mediante un ensayo cuantitativo basado en PCR dirigido a la región conservada del gen del VIH. El nivel de pvDNA del VIH se presentará como copias por millón de células T CD4+. El número de células de entrada se determina mediante una PCR separada dirigida a genes endógenos humanos.

ARN del VIH asociado a células (CA) El ARN celular total se extraerá de las células T CD4+ para generar ADN complementario total (ADNc) mediante transcripción inversa. Luego, el ADNc se utiliza para determinar el nivel de ARN del VIH de CA mediante un ensayo cuantitativo basado en PCR que se dirige a las secuencias conservadas del VIH en un laboratorio designado por el Patrocinador. El nivel de ARN de CA se presenta como copia de transcripciones de genes constitutivos endógenos, cuyo número de copias se determinará de forma independiente mediante una PCR separada dirigida a las transcripciones de ARN del gen constitutivo.

Referencia

1. Pinkevych M, et al. La reactivación del VIH a partir de la interrupción de la latencia posterior al tratamiento ocurre en promedio cada 5 a 8 días, lo que implica remisión del VIH. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. El papel de la hidroxiurea en la mejora del control virológico logrado mediante la interrupción estructurada del tratamiento en la infección primaria por VIH: resultados finales de un ensayo clínico aleatorizado (Pulse). J. Adquirir. InmuneDef. Sindr. 42,192-202(2006)
3. DavenportMP, et al. Cura funcional del VIH: la escala del desafío. Naturaleza Rev Immunol 19: 45 (2019)