抗レトロウイルス療法を受けている HIV-1 感染患者のウイルス保有量と免疫機能の測定

導入

現在の抗レトロウイルス療法 (ART) は、血漿ウイルス量を検出限界以下に抑制し、宿主免疫を回復させる効果が高く、HIV-1 感染患者の生存期間を著しく延長します。 ただし、HIV-1 は投薬を中断したり不規則にすると数週間以内に治療前のレベルに回復します1,2。 HIV-1 が強力な ART によって根絶されない理由は、休止状態の CD4 T 細胞における潜在的な HIV-1 の貯蔵庫が、血漿ウイルス RNA の長期抑制であっても持続的に存在するためであると説明できます。 治療中断後のウイルスのリバウンドを予防または遅延させ、治療後の寛解または HIV-1 の機能的治癒をもたらすことを目的としたいくつかの治療アプローチが研究されています 3。 この研究は、ART中にHIV-1感染患者のウイルス保有量とHIV-1特異的T細胞反応を測定して、HIV-1持続のメカニズムを理解し、機能的治癒の可能性のある方針を確立するのに役立てることを目的としています。

方法 登録基準

1. 定期的な追跡調査を受け、抗レトロウイルス療法を受けているHIV-1感染が確認された患者
2. 20代～50代の男性

除外基準

1. 重篤な併存疾患
2. 明らかな肝機能障害または腎機能障害
3. 免疫抑制療法を受けている

期間と頻度 合計 48 週間の追跡調査と 8 週間ごとの検査室測定

臨床検査測定 インフォームドコンセントに署名した後、被験者から血液検体を採取します。 登録時のベースラインから 48 週間の終わりまで、8 週間ごとに、ウイルス保有者と HIV-1 特異的 T 細胞応答を測定するために約 30 mL の血液が採取され、送られます。

ＨＩＶ－１ Ｇａｇ特異的Ｔ細胞応答 組換えＨＩＶ－１ Ｇａｇ ｐ２４（５μｇ／ｍＬ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）をＨＩＶ－１抗原として使用する。 ＰＢＭＣ（１０６）は、２４ウェルプラット内でｐ２４の存在下または非存在下で６日間インキュベートされる。 BrdU が取り込まれた T 細胞の頻度はフローサイトメトリーによって測定されます。

HIV ウイルスの保有者

末梢血中の HIV ウイルス保有者のレベルと内容は、CD4+ T 細胞 (HIV 保有者を保有する主要な細胞タイプ) の 2 つの主要な成分で分析されます。

• プロウイルス DNA
• 細胞関連 (CA) HIV RNA HIV pvDNA と CA RNA の定量は、PCR ベースの定量システムに基づいています。

プロウイルス DNA の評価 血液サンプルは、細胞 DNA 抽出のために CD4+ T 細胞を単離するために使用されます。

抽出された DNA の標準化されたアリコート量を使用して、HIV 遺伝子の保存領域をターゲットとする PCR ベースの定量アッセイを通じて HIV pvDNA レベルを決定します。 HIV pvDNA レベルは、CD4+ T 細胞 100 万個あたりのコピー数として表示されます。入力細胞数は、ヒト内因性遺伝子をターゲットとする別の PCR によって決定されます。

細胞関連 (CA) HIV RNA CD4+ T 細胞から全細胞 RNA が抽出され、逆転写によって全相補 DNA (cDNA) が生成されます。 次に、この cDNA を使用して、スポンサーによって指定された研究室で HIV の保存配列を標的とする PCR ベースの定量アッセイを通じて CA HIV RNA レベルを決定します。 CA RNA レベルは内因性ハウスキーピング遺伝子転写物の範囲として示され、そのコピー数はハウスキーピング遺伝子の RNA 転写物を標的とする別の PCR によって独立して決定されます。

参照

1. ピンケビッチ M ら 治療中断後の潜伏期間からの HIV の再活性化は平均して 5 ～ 8 日ごとに起こり、HIV 寛解に影響を及ぼします。 PLOS Pathog11、e1005000 (2015)。
2. ブロッホMTら。 原発性 HIV 感染症における計画的な治療中断を通じて達成されるウイルス制御の強化におけるヒドロキシ尿素の役割: ランダム化臨床試験 (Pulse) の最終結果。 J.取得。 免疫力 症候群 42,192-202(2006)
3. DavenportMP ら。 HIV の機能的治癒: 課題の規模。 Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)