接受抗逆转录病毒治疗的 HIV-1 感染者的病毒库和免疫功能测定

介绍

目前的抗逆转录病毒治疗（ART）可以非常有效地将血浆病毒载量抑制到检测限以下并恢复宿主免疫力，从而显着延长HIV-1感染患者的生存期。 然而，HIV-1 会在中断或不规律用药的几周内反弹至治疗前的水平1,2。 HIV-1无法被强大的ART根除的原因可以解释为，即使血浆病毒RNA长期受到抑制，静息CD4 T细胞中的潜伏HIV-1库仍将持续存在。 目前正在研究几种旨在预防或延迟治疗中断后病毒反弹、实现 HIV-1 治疗后缓解或功能性治愈的治疗方法3。 本研究旨在测量 ART 期间 HIV-1 感染患者的病毒库大小和 HIV-1 特异性 T 细胞反应，以帮助了解 HIV-1 持续存在的机制，然后帮助制定功能性治愈的潜在政策。

方法 入学标准

1. 定期随访并接受抗逆转录病毒治疗的确诊 HIV-1 感染患者
2. 20-50岁男性

排除标准

1. 严重的合并症
2. 明显的肝或肾功能障碍
3. 接受免疫抑制治疗

持续时间和频率 总共 48 周的随访，每 8 周进行一次实验室测量

实验室测量 在受试者签署知情同意书后，我们将抽取受试者的血液样本。 从入组时的基线到 48 周结束，每 8 周将抽取约 30 mL 血液用于测定病毒库和 HIV-1 特异性 T 细胞反应。

HIV-1 Gag 特异性 T 细胞反应 重组 HIV-1 Gag p24（5 ug/mL；Research Diagnostics, Inc.）将用作 HIV-1 抗原。 PBMC (106) 将在有或没有 p24 的情况下在 24 孔板中孵育 6 天。 掺入 BrdU 的 T 细胞的频率将通过流式细胞术测量。

HIV病毒库

外周血中 HIV 病毒储存库的水平和含量将在 CD4+ T 细胞（携带 HIV 储存库的主要细胞类型）中以 2 个主要成分进行分析：

• 前病毒DNA
• 细胞相关 (CA) HIV RNA HIV pvDNA 和 CA RNA 的定量均基于 PCR 定量系统。

前病毒 DNA 评估 血液样本将用于分离 CD4+ T 细胞以提取细胞 DNA。

提取的 DNA 的标准化等分量用于通过针对 HIV 基因保守区域的基于 PCR 的定量测定来确定 HIV pvDNA 水平。 HIV pvDNA 水平将以每百万 CD4+ T 细胞的拷贝数表示。输入细胞数由针对人内源基因的单独 PCR 确定。

细胞相关 (CA) HIV RNA 从 CD4+ T 细胞中提取总细胞 RNA，通过逆转录生成总互补 DNA (cDNA)。 然后，在申办者指定的实验室中，通过基于 PCR 的定量测定，使用 cDNA 来确定 CA HIV RNA 水平，该测定以 HIV 的保守序列为目标。 CA RNA水平呈现内源管家基因转录本的拷贝，其拷贝数将由针对管家基因RNA转录本的单独PCR独立确定。

参考

1. 平克维奇 M 等人。 治疗中断后，HIV 从潜伏期重新激活平均每 5-8 天发生一次，这对 HIV 缓解有影响。 PLOS Pathog11，e1005000 (2015)。
2. 布洛赫 MT 等人。 羟基脲在原发性 HIV 感染中通过结构化治疗中断增强病毒学控制的作用：随机临床试验（Pulse）的最终结果。 J. 收购。 免疫防御。 综合。 42,192-202(2006)
3. 达文波特 MP 等人。 HIV 的功能性治愈：挑战的规模。 自然免疫学杂志 19: 45 (2019)