Meting van het virale reservoir en de immuunfunctie bij met HIV-1 geïnfecteerde patiënten die antiretrovirale therapie krijgen

Invoering

De huidige antiretrovirale therapie (ART) is zeer effectief om de virale lading in het plasma te onderdrukken tot onder de detectielimiet en om de immuniteit van de gastheer te herstellen, waardoor de overleving van met HIV-1 geïnfecteerde patiënten opmerkelijk wordt verlengd. HIV-1 zal echter binnen enkele weken na onderbreking of onregelmatige medicatie terugkeren naar het niveau van vóór de behandeling1,2. De reden waarom HIV-1 niet zou worden uitgeroeid door krachtige ART kan worden verklaard doordat het reservoir van latente HIV-1 in rustende CD4 T-cellen aanhoudend zal blijven bestaan, zelfs bij langdurige onderdrukking van plasmaviraal RNA. Er worden verschillende therapeutische benaderingen onderzocht die gericht zijn op het voorkomen of vertragen van de virale rebound na onderbreking van de behandeling, waardoor een remissie of functionele genezing van HIV-1 na de behandeling ontstaat3. Deze studie is bedoeld om de omvang van het virale reservoir en de HIV-1-specifieke T-celrespons bij HIV-1-geïnfecteerde patiënten tijdens ART te meten om het mechanisme van HIV-1-persistentie te helpen begrijpen en vervolgens een mogelijk beleid voor functionele genezing te helpen vaststellen.

Methoden Inschrijvingscriteria

1. Bevestigde met HIV-1 geïnfecteerde patiënten die regelmatig worden opgevolgd en antiretrovirale therapie krijgen
2. Mannen met 20-50 jaar oud

Uitsluitingscriteria

1. Ernstige comorbiditeit
2. Duidelijke lever- of nierdisfunctie
3. Immunosuppressieve therapie krijgen

Duur en frequentie In totaal 48 weken follow-up en elke 8 weken laboratoriummeting

Laboratoriummeting We zullen het bloedmonster van de proefpersonen afnemen nadat zij de geïnformeerde toestemming hebben ondertekend. Er zal elke 8 weken ongeveer 30 ml bloed worden afgenomen en verzonden voor de bepaling van de virale reservoir- en HIV-1-specifieke T-celreacties, vanaf de basislijn bij inschrijving tot het einde van 48 weken.

HIV-1 Gag-specifieke T-celreacties Recombinant HIV-1 Gag p24 (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) zal worden gebruikt als HIV-1-antigeen. PBMC (106) zal gedurende 6 dagen met of zonder p24 in platen met 24 putjes worden geïncubeerd. De frequentie van T-cellen met BrdU-opname zal worden gemeten door middel van flowcytometrie.

HIV-virale reservoirs

Niveaus en inhoud van HIV-virale reservoirs in het perifere bloed zullen worden geanalyseerd in CD4+ T-cellen (het belangrijkste celtype dat het HIV-reservoir herbergt) in 2 hoofdcomponenten:

• Proviraal DNA
• Celgeassocieerde (CA) HIV-RNA's De kwantificeringen voor zowel HIV-pvDNA als CA-RNA zijn gebaseerd op het op PCR gebaseerde kwantitatieve systeem.

Provirale DNA-beoordeling De bloedmonsters zullen worden gebruikt om CD4+ T-cellen te isoleren voor cellulaire DNA-extractie.

Een gestandaardiseerde hoeveelheid geëxtraheerd DNA wordt gebruikt om het HIV-pvDNA-niveau te bepalen via een op PCR gebaseerde kwantitatieve test gericht op het geconserveerde gebied van het HIV-gen. Het HIV-pvDNA-niveau zal worden weergegeven als kopieën per miljoen CD4+ T-cellen. Het aantal ingevoerde cellen wordt bepaald door een afzonderlijke PCR gericht op menselijke endogene genen.

Celgeassocieerd (CA) HIV-RNA Totaal cellulair RNA zal worden geëxtraheerd uit CD4+ T-cellen om totaal complementair DNA (cDNA) te genereren via omgekeerde transcriptie. Het cDNA wordt vervolgens gebruikt om het CA-HIV-RNA-niveau te bepalen via een op PCR gebaseerde kwantitatieve test die zich richt op de geconserveerde sequenties van HIV in een aangewezen laboratorium door de sponsor. Het CA RNA-niveau wordt gepresenteerd als een scopie van endogene huishoudgentranscripten, waarvan het kopieaantal onafhankelijk zal worden bepaald door een afzonderlijke PCR gericht op de RNA-transcripten van het huishoudgen.

Referentie

1. Pinkevych M, et al. HIV-reactivatie door latentie na onderbreking van de behandeling vindt gemiddeld elke 5-8 dagen plaats, wat gevolgen heeft voor HIV-remissie. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. De rol van hydroxyurea bij het verbeteren van de virologische controle die wordt bereikt door gestructureerde onderbreking van de behandeling bij primaire HIV-infectie: eindresultaten van een gerandomiseerde klinische studie (Pulse). J. Verwerven. ImmuunDef. Syndr. 42.192-202 (2006)
3. Davenport MP, et al. Functionele genezing van HIV: de omvang van de uitdaging. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)