Medição do reservatório viral e da função imunológica em pacientes infectados pelo HIV-1 sob terapia antirretroviral

Introdução

A terapia antirretroviral (TARV) atual é altamente eficaz para suprimir a carga viral plasmática abaixo do limite de detecção e para restaurar a imunidade do hospedeiro, prolongando assim notavelmente a sobrevivência de pacientes infectados pelo HIV-1. Contudo, o VIH-1 regressará aos níveis anteriores ao tratamento semanas após a interrupção ou medicação irregular1,2. A razão pela qual o VIH-1 não seria erradicado pela poderosa TARV pode ser explicada pelo facto de o reservatório de VIH-1 latente nas células T CD4 em repouso existir persistentemente, mesmo na supressão a longo prazo do ARN viral plasmático. Diversas abordagens terapêuticas que visam prevenir ou retardar o rebote viral após a interrupção do tratamento, produzindo uma remissão pós-tratamento ou cura funcional do HIV-1, estão sendo investigadas3. Este estudo visa medir o tamanho do reservatório viral e a resposta das células T específicas do HIV-1 em pacientes infectados pelo HIV-1 durante a TARV para ajudar a compreender o mecanismo de persistência do HIV-1 e, em seguida, ajudar a estabelecer uma política potencial para cura funcional.

Métodos Critérios de inscrição

1. Pacientes infectados pelo HIV-1 confirmados em acompanhamento regular e recebendo terapia antirretroviral
2. Homens entre 20 e 50 anos

Critério de exclusão

1. Comorbidade grave
2. Disfunção hepática ou renal óbvia
3. Recebendo terapia imunossupressora

Duração e frequência Um total de 48 semanas de acompanhamento e medições laboratoriais a cada 8 semanas

Medição laboratorial Coletaremos a amostra de sangue dos sujeitos após eles assinarem o consentimento informado. Cerca de 30 mL de sangue serão coletados e enviados para determinação do reservatório viral e respostas de células T específicas do HIV-1, a cada 8 semanas, desde o início do estudo até o final de 48 semanas.

Respostas de células T específicas para HIV-1 Gag O HIV-1 Gag p24 recombinante (5 ug/mL; Research Diagnostics, Inc.) será usado como antígeno do HIV-1. PBMC (106) será incubado com ou sem p24 em placas de 24 poços durante 6 dias. A frequência de células T com incorporação de BrdU será medida por citometria de fluxo.

Reservatórios virais do HIV

Os níveis e conteúdos dos reservatórios virais do HIV no sangue periférico serão analisados ​​em células T CD4+ (o principal tipo de célula que abriga o reservatório do HIV) em 2 componentes principais:

• ADN proviral
• RNAs de HIV associados a células (CA) As quantificações para pvDNA de HIV e RNA de CA baseiam-se no sistema quantitativo baseado em PCR.

Avaliação Proviral de DNA As amostras de sangue serão utilizadas para isolar células T CD4+ para extração de DNA celular.

A quantidade de alíquota padronizada de DNA extraído é usada para determinar o nível de pvDNA do HIV por meio de ensaio quantitativo baseado em PCR visando a região conservada do gene do HIV. O nível de pvDNA do HIV será apresentado como cópias por milhão de células T CD4+. O número de células de entrada é determinado por uma PCR separada visando gene(s) endógeno(s) humano(s).

RNA de HIV associado a células (CA) O RNA celular total será extraído de células T CD4+ para gerar DNA complementar total (cDNA) por meio de transcrição reversa. O cDNA é então usado para determinar o nível de RNA do HIV CA através de ensaio quantitativo baseado em PCR que tem como alvo as sequências conservadas do HIV em um laboratório designado pelo Patrocinador. O nível de RNA de CA é apresentado como uma cópia dos transcritos endógenos do gene de manutenção, cujo número de cópias será determinado independentemente por uma PCR separada visando os transcritos de RNA do gene de manutenção.

Referência

1. Pinkevych M, et al. A reactivação do VIH devido à interrupção da latência pós-tratamento ocorre em média a cada 5-8 dias - implicações para a remissão do VIH. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. O papel da hidroxiureia na melhoria do controle virológico alcançado através da interrupção estruturada do tratamento na infecção primária pelo HIV: resultados finais de um ensaio clínico randomizado (Pulse). J. Adquirir. ImunoDef. Sindr. 42.192-202(2006)
3. DavenportMP, et al. Cura funcional do HIV: a escala do desafio. Natureza Rev Immunol 19: 45 (2019)