Misurazione del serbatoio virale e della funzione immunitaria nei pazienti con infezione da HIV-1 sottoposti a terapia antiretrovirale

introduzione

L’attuale terapia antiretrovirale (ART) è altamente efficace nel sopprimere la carica virale plasmatica al di sotto del limite di rilevamento e nel ripristinare l’immunità dell’ospite, prolungando così notevolmente la sopravvivenza dei pazienti con infezione da HIV-1. Tuttavia, l’HIV-1 tornerà ai livelli pre-trattamento entro poche settimane dall’interruzione o dalla terapia irregolare1,2. Il motivo per cui l’HIV-1 non verrebbe eradicato dalla potente ART può essere spiegato dal fatto che il serbatoio di HIV-1 latente nelle cellule T CD4 a riposo esisterà persistentemente anche con la soppressione a lungo termine dell’RNA virale plasmatico. Sono allo studio diversi approcci terapeutici che mirano a prevenire o ritardare la ricomparsa virale dopo l’interruzione del trattamento, producendo una remissione post-trattamento o una cura funzionale dell’HIV-13. Questo studio misurerà la dimensione del serbatoio virale e la risposta delle cellule T specifiche dell’HIV-1 nei pazienti con infezione da HIV-1 durante l’ART per aiutare a comprendere il meccanismo della persistenza dell’HIV-1, quindi per aiutare a stabilire una potenziale politica per la cura funzionale.

Metodi Criteri di iscrizione

1. Pazienti con infezione da HIV-1 confermata sottoposti a regolare follow-up e sottoposti a terapia antiretrovirale
2. Uomini con 20-50 anni

Criteri di esclusione

1. Comorbidità grave
2. Evidente disfunzione epatica o renale
3. Ricevere una terapia immunosoppressiva

Durata e frequenza Un totale di 48 settimane di follow-up e misurazioni di laboratorio ogni 8 settimane

Misurazione di laboratorio Preleveremo il campione di sangue dai soggetti dopo che avranno firmato il consenso informato. Verranno prelevati e inviati circa 30 ml di sangue per la determinazione del serbatoio virale e delle risposte delle cellule T specifiche dell'HIV-1, ogni 8 settimane, dal basale al momento dell'arruolamento fino alla fine delle 48 settimane.

Risposte delle cellule T specifiche per il Gag dell'HIV-1 Il Gag ricombinante p24 dell'HIV-1 (5 ug/mL; Research Diagnostics, Inc.) sarà utilizzato come antigene dell'HIV-1. Le PBMC (106) saranno incubate con o senza p24 in piastre da 24 pozzetti per 6 giorni. La frequenza delle cellule T con incorporazione di BrdU sarà misurata mediante citometria a flusso.

Serbatoi virali dell'HIV

I livelli e il contenuto dei serbatoi virali dell'HIV nel sangue periferico saranno analizzati nelle cellule T CD4+ (il principale tipo di cellula che ospita il serbatoio dell'HIV) in 2 componenti principali:

• DNA provirale
• RNA dell'HIV associati alle cellule (CA) Le quantificazioni sia del pvDNA dell'HIV che del CA RNA si basano sul sistema quantitativo basato sulla PCR.

Valutazione del DNA provirale I campioni di sangue verranno utilizzati per isolare le cellule T CD4+ per l'estrazione del DNA cellulare.

Una quantità di aliquota standardizzata di DNA estratto viene utilizzata per determinare il livello di pvDNA dell'HIV attraverso un test quantitativo basato sulla PCR mirato alla regione conservata del gene dell'HIV. Il livello di pvDNA dell'HIV sarà presentato come copie per milione di cellule T CD4+. Il numero di cellule di input è determinato da una PCR separata mirata ai geni endogeni umani.

RNA dell'HIV cell-associato (CA) L'RNA cellulare totale sarà estratto dalle cellule T CD4+ per generare DNA complementare totale (cDNA) attraverso la trascrizione inversa. Il cDNA viene quindi utilizzato per determinare il livello di CA HIV RNA attraverso un test quantitativo basato sulla PCR che prende di mira le sequenze conservate dell'HIV presso un laboratorio designato dallo Sponsor. Il livello di CA RNA viene presentato come una serie di trascritti di geni housekeeping endogeni, il cui numero di copie sarà determinato in modo indipendente mediante una PCR separata mirata alle trascrizioni di RNA del gene housekeeping.

Riferimento

1. Pinkevych M, et al. La riattivazione dell'HIV dalla latenza dopo l'interruzione del trattamento si verifica in media ogni 5-8 giorni, con implicazioni per la remissione dell'HIV. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT, et al. Il ruolo dell'idrossiurea nel migliorare il controllo virologico ottenuto attraverso l'interruzione strutturata del trattamento nell'infezione primaria da HIV: risultati finali di uno studio clinico randomizzato (Pulse). J. Acquisire. ImmuneDef. Sindr. 42,192-202(2006)
3. DavenportMP, et al. Cura funzionale dell’HIV: la portata della sfida. Natura Rev Immunol 19: 45 (2019)