Měření virového rezervoáru a imunitní funkce u pacientů infikovaných HIV-1 pod antiretrovirovou terapií

Úvod

Současná antiretrovirová terapie (ART) je vysoce účinná pro potlačení plazmatické virové zátěže pod limit detekce a pro obnovení imunity hostitele, čímž výrazně prodlužuje přežití pacientů infikovaných HIV-1. HIV-1 se však vrátí na úroveň před léčbou během týdnů po přerušení nebo nepravidelné medikaci1,2. Důvod, proč by HIV-1 nebyl eradikován účinnou ART, lze vysvětlit tím, že rezervoár latentního HIV-1 v klidových CD4 T buňkách bude trvale existovat i při dlouhodobé supresi plazmatické virové RNA. Zkoumá se několik terapeutických přístupů, které mají za cíl zabránit nebo oddálit návrat viru po přerušení léčby, což vede k remisi po léčbě nebo funkčnímu vyléčení HIV-13. Tato studie má změřit velikost virového rezervoáru a HIV-1-specifickou odpověď T-buněk u pacientů infikovaných HIV-1 během ART, aby pomohla porozumět mechanismu přetrvávání HIV-1 a pak pomohla vytvořit potenciální politiku pro funkční vyléčení.

Metody Kritéria zápisu

1. Potvrzení pacienti infikovaní HIV-1, kteří jsou pravidelně sledováni a dostávají antiretrovirovou léčbu
2. Muži ve věku 20-50 let

Kritéria vyloučení

1. Závažná komorbidita
2. Zjevná dysfunkce jater nebo ledvin
3. Přijímání imunosupresivní terapie

Délka a frekvence Celkem 48 týdnů sledování a laboratorní měření každých 8 týdnů

Laboratorní měření Vzorek krve odebereme subjektům po podpisu informovaného souhlasu. Asi 30 ml krve bude odebráno a odesláno ke stanovení virového rezervoáru a HIV-1-specifických T-buněčných odpovědí každých 8 týdnů, od základní linie při zařazení do konce 48. týdne.

HIV-1 Gag-specifické reakce T-buněk Rekombinantní HIV-1 Gag p24 (5 ug/ml; Research Diagnostics, Inc.) bude použit jako HIV-1 antigen. PBMC (106) budou inkubovány s nebo bez p24 na 24jamkových destičkách po dobu 6 dnů. Frekvence T buněk s inkorporací BrdU bude měřena průtokovou cytometrií.

Virové rezervoáry HIV

Hladiny a obsahy rezervoárů viru HIV v periferní krvi budou analyzovány v CD4+ T buňkách (hlavní buněčný typ obsahující rezervoár HIV) ve 2 hlavních složkách:

• Provirová DNA
• HIV RNA spojené s buňkami (CA) Kvantifikace pro HIV pvDNA i CA RNA jsou založeny na kvantitativním systému založeném na PCR.

Posouzení provirální DNA Vzorky krve budou použity k izolaci CD4+ T buněk pro extrakci buněčné DNA.

Standardizované alikvotní množství extrahované DNA se používá ke stanovení hladiny HIV pvDNA pomocí kvantitativního testu založeného na PCR zaměřeném na konzervovanou oblast genu HIV. Hladina HIV pvDNA bude prezentována jako kopie na milion CD4+ T buněk. Vstupní počet buněk je určen samostatnou PCR zacílenou na lidský endogenní gen(y).

HIV RNA spojená s buňkami Celková buněčná RNA bude extrahována z CD4+ T buněk za účelem vytvoření celkové komplementární DNA (cDNA) prostřednictvím reverzní transkripce. cDNA je pak použita ke stanovení hladiny CA HIV RNA pomocí kvantitativního testu založeného na PCR, který se zaměřuje na konzervované sekvence HIV v laboratoři určené sponzorem. Úroveň CA RNA je prezentována kopií transkriptů endogenních provozních genů, jejichž počet kopií bude stanoven nezávisle pomocí samostatné PCR zacílené na RNA transkripty provozního genu.

Odkaz

1. Pinkevych M, a kol. K reaktivaci HIV z latence po přerušení léčby dochází v průměru každých 5-8 dní – důsledky pro remisi HIV. PLOS Pathog11, e1005000 (2015).
2. Bloch MT a kol. Role hydroxymočoviny při posilování virologické kontroly dosažené prostřednictvím strukturovaného přerušení léčby u primární infekce HIV: konečné výsledky z randomizované klinické studie (Pulse). J. Acquir. ImmuneDef. Syndr. 42,192-202 (2006)
3. DavenportMP a kol. Funkční léčba HIV: rozsah problému. Nature Rev Immunol 19: 45 (2019)