Genetiska och dietära prediktorer för anti-trombocytrespons

Syfte: I detta syfte kommer utredarna att testa hypotesen att n-3 PUFA modifierar aspirin anti-trombocytrespons, genom att mäta och jämföra tre olika indikatorer på aspirinsvar hos individer med extremt höga och låga RBC n-3 PUFA-nivåer, under en basalt tillstånd och efter 1 veckas behandling med aspirin en gång om dagen. De tre indikatorerna är: 1) trombocytkoncentrationer av TXB2 och 20-HETE; 2) trombocytaggregation ex vivo (som svar på yttre stimuli); och 3) aspirin kovalent addukt av COX-1. Utredarna kommer också att testa om vanliga varianter av generna CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 och ACTN1 är associerade med basala och aspirin-inducerade förändringar i trombocytaggregation och, i en explorativ analys, modifiera effekterna av n-3 PUFA på aspirinsvar.

Procedurer och befolkning: Utredare från University of Montana, Southcentral Foundation och Oregon Health & Science University kommer att rekrytera totalt 150 personer (50 på varje plats) för att delta i studien. På varje prestationsplats kommer deltagarna som rekryteras att representera 25 individer med höga och 25 individer med låga RBC n-3 PUFA-koncentrationer. Efter att ha lämnat skriftligt medgivande kommer varje studiedeltagare att screenas för medicinsk historia och kliniska laboratorietester för att säkerställa god hälsa och bra lever-, njur- och blodprovsparametrar. Om de visar sig vara berättigade kommer varje deltagare att ge 12-timmars fasta (över natten) blodprover för isolering av plasma, blodplättar, lymfocyter och röda blodkroppar. Ett separat blodprov kommer att samlas in i ett citratbehandlat rör för blodplättsaggregationstestning med PFA-100-plattformen. Isolerade blodfraktioner kommer att förvaras vid -80°C.

Efter baslinjeprovtagningen kommer varje deltagare att ges sex doser acetylsalicylsyra (80 mg/dag i 2 dagar) och instrueras att ta en dos dagligen cirka kl. 9.00. Dagen efter den sista acetylsalicylsyradosen kommer deltagaren att ge blodprover för upprepad blodplättsaggregationstestning, blodplättslipidanalys och mätning av acetylsalicylsyrakovalent addukt till COX-1, och ett punkturinprov för att bekräfta acetylsalicylsyrakonsumtion genom att testa för salicylat. Under 24 timmar före blodplättsaggregationstestning kommer studiedeltagarna att uppmanas att undvika mat som kan leda till falska testresultat (t.ex. choklad, te, kaffe, cola, rött vin, öl, tomat, vindruvor, druvjuice, apelsin och tranbär juice, såväl som traditionell vild mat som inkluderar bär, växtrötter, grönsaker etc).

Analytiska metoder: Helblod, vårdpunkt, blodplättsaggregationstestning kommer att utföras med det automatiserade PFA-100-instrumentet. Forskningspersonalens prestationer kommer att jämföras med kliniska testtjänster på varje plats, som en kvalitetskontrollåtgärd. I varje testinställning kommer utredarna att få resultat i duplikat för både kollagen/epinefrin och kollagen/ADP-patroner. Utredarna kommer också att mäta blodplättskoncentrationer av TXB2, 20-HETE och AA med LC-MS/MS. Dessutom kommer utredarna att utveckla och använda en metod för att kvantifiera aspirinkovalent addukt av COX-1 i isolerade blodplättar från studiedeltagare.

Statistiska metoder: För varje studiepopulation och undergrupper med extrema RBC n-3 PUFA-fenotyper kommer forskarna att använda linjära regressionsmodeller med robusta standardfel för att identifiera signifikanta skillnader i genomsnittliga absoluta blodplättsaggregationstestresultat under basala och aspirinbehandlade förhållanden ( primärt resultat), såväl som förändringen av trombocytaggregationen efter behandling till baslinje. Heterogenitet mellan par av extrema fenotyper undergrupper kommer att redovisas genom att inkludera kön, ålder, BMI och trombocytantal som kovariater i regressionsmodellen. Provstorleksberäkning för varje prestationsställe (n = 25 per n-3 PUFA-undergrupp) baserades på att ha en styrka på minst 0,8 för att detektera en skillnad i genomsnittlig trombocytaggregation mellan de två extrema (0-10 och 90-100 percentilerna) n -3 PUFA-undergrupper under basala förhållanden, vid en signifikansnivå av 0,05. Som en sekundär analysnivå, för varje undergrupp av de extrema RBC n-3 PUFA-fenotyperna, kommer utredarna också att jämföra genomsnittliga blodplättskoncentrationer av TXB2 och 20-HETE under basala och aspirinbehandlade förhållanden, såväl som efter behandling till -förändring av baslinjen. Slutligen kommer en tredje nivå av analys att involvera att testa varje studiepopulation för en skillnad i omfattningen av aspirinaddukt till COX-1 mellan grupper med extrema RBC n-3 PUFA-fenotyper. Utredarna kommer att testa för samband mellan blodplättsaggregationstestresultat och biokemiska mått på trombocytaktivering, varje studiepopulation separat och i aggregat.

Utredarna kommer att använda linjära regressionsmodeller för att testa för ett samband mellan vanliga genotyper CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 och ACTN1 och de genomsnittliga absoluta blodplättsaggregationstestresultaten under basala och aspirinbehandlade förhållanden, såväl som efterbehandling till- baslinjeförändring i trombocytaggregation. I en explorativ analys kommer utredarna att tillämpa linjära blandade effekter (LME)-modeller på den kombinerade datauppsättningen före och efter behandling för att testa för samband med n-3 PUFA-grupp- och läkemedelseffekter, samt för att identifiera eventuella modifieringar av dessa effekter genom CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 och ACTN1 variation genom att inkludera och testa för signifikanta interaktionseffekter i modellerna. Utredarna kommer att inkludera slumpmässiga effekter i LME för att ta hänsyn till potentiell heterogenitet i var och en av populationerna.