Verihiutaleiden vastaisen vasteen geneettiset ja ruokavalion ennustajat

Tarkoitus: Tässä tarkoituksessa tutkijat testaavat hypoteesia, jonka mukaan n-3 PUFA:t muuttavat aspiriinin verihiutaleiden vastaista vastetta mittaamalla ja vertaamalla kolmea erilaista aspiriinivasteen indikaattoria henkilöillä, joilla on erittäin korkea ja matala RBC n-3 PUFA -taso. perustilaan ja 1 viikon kerran päivässä suoritetun aspiriinihoidon jälkeen. Kolme indikaattoria ovat: 1) verihiutaleiden TXB2- ja 20-HETE-pitoisuudet; 2) verihiutaleiden aggregaatio ex vivo (vasteena ulkoisille ärsykkeille); ja 3) COX-1:n kovalenttinen aspiriiniaddukti. Tutkijat testaavat myös, liittyvätkö CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- ja ACTN1-geenien yleiset muunnelmat perus- ja aspiriinin aiheuttamiin muutoksiin verihiutaleiden aggregaatiossa, ja tutkivat analyysissä muuttavat n-3 PUFA:iden vaikutuksia aspiriinivaste.

Menettelyt ja väestö: Montanan yliopiston, Southcentral Foundationin ja Oregon Health & Science Universityn tutkijat rekrytoivat yhteensä 150 henkilöä (50 kussakin paikassa) osallistumaan tutkimukseen. Jokaisella suorituspaikalla värvätyt osallistujat edustavat 25 henkilöä, joilla on korkea ja 25 henkilöä, joilla on alhainen RBC n-3 PUFA -pitoisuus. Kirjallisen suostumuksen antamisen jälkeen jokainen tutkimukseen osallistuja seulotaan sairaushistorian ja kliinisen laboratoriotestin suhteen hyvän terveyden ja hyvän maksan, munuaisten ja verikoeparametrien varmistamiseksi. Jos todetaan kelvollisiksi, jokainen osallistuja toimittaa 12 tunnin paaston aikana (yön yli) verinäytteet plasman, verihiutaleiden, lymfosyyttien ja punasolujen eristämiseksi. Erillinen verinäyte kerätään sitraattikäsiteltyyn putkeen verihiutaleiden aggregaatiotestausta varten PFA-100-alustalla. Eristetyt verifraktiot säilytetään -80 °C:ssa.

Lähtötilanteen näytteenoton jälkeen jokaiselle osallistujalle annetaan kuusi annosta aspiriinia (80 mg/vrk 2 päivän ajan) ja opastetaan ottamaan yksi annos päivittäin noin klo 9.00. Viimeisen aspiriiniannoksen jälkeisenä päivänä osallistuja toimittaa verinäytteitä toistuvaa verihiutaleiden aggregaatiotestausta, verihiutaleiden lipidianalyysiä ja kovalenttisen aspiriinin COX-1-additiotuotteen mittaamista varten sekä pistevirtsanäytteen aspiriinin kulutuksen vahvistamiseksi salisylaattitestauksella. 24 tuntia ennen verihiutaleiden aggregaatiotestausta tutkimuksen osallistujia pyydetään välttämään elintarvikkeita, jotka voivat johtaa vääriin testituloksiin (esim. suklaa, tee, kahvi, cola, punaviini, olut, tomaatti, viinirypäleet, viinirypälemehu, appelsiini ja karpalo mehut sekä perinteiset luonnonvaraiset ruoat, jotka sisältävät marjoja, kasvien juuria, kasvisvihanneksia jne).

Analyyttiset menetelmät: Kokoveri-, hoitopiste- ja verihiutaleiden aggregaatiotestit suoritetaan käyttämällä automatisoitua PFA-100-laitetta. Tutkimushenkilöstön suorituskykyä verrataan jokaisen toimipisteen kliinisiin testauspalveluihin laadunvalvontatoimenpiteenä. Kussakin testiasetuksessa tutkijat saavat kaksinkertaiset tulokset sekä kollageeni-/adrenaliini- että kollageeni-/ADP-patruunoista. Tutkijat mittaavat myös verihiutaleiden TXB2-, 20-HETE- ja AA-pitoisuudet LC-MS/MS:llä. Lisäksi tutkijat kehittävät ja käyttävät menetelmää aspiriinin kovalenttisen COX-1-adduktin kvantifioimiseksi tutkimuksen osallistujien eristetyissä verihiutaleissa.

Tilastolliset menetelmät: Jokaisessa tutkimuspopulaatiossa ja alaryhmissä, joissa on äärimmäisiä RBC n-3 PUFA -fenotyyppejä, tutkijat käyttävät lineaarisia regressiomalleja, joissa on vankat standardivirheet tunnistaakseen merkittävät erot keskimääräisissä absoluuttisissa verihiutaleiden aggregaatiotesteissä perus- ja aspiriinilla hoidetuissa olosuhteissa ( ensisijainen tulos), sekä hoidon jälkeinen muutos verihiutaleiden aggregaatiossa lähtötilanteeseen. Heterogeenisuus äärimmäisten fenotyyppien alaryhmien parien välillä otetaan huomioon sisällyttämällä sukupuoli, ikä, BMI ja verihiutaleiden määrä kovariaatteina regressiomalliin. Näytteen koon laskenta kullekin suoritusalueelle (n = 25 n-3 PUFA-alaryhmää kohti) perustui vähintään 0,8:n tehoon kahden äärimmäisen (0-10 ja 90-100 prosenttipisteen) välisen keskimääräisen verihiutaleiden aggregaation eron havaitsemiseksi. -3 PUFA-alaryhmää perusolosuhteissa, merkitsevyystasolla 0,05. Analyysin toissijaisena tasona tutkijat vertailevat kunkin äärimmäisten RBC n-3 PUFA -fenotyyppien alaryhmän verihiutaleiden TXB2- ja 20-HETE keskimääräisiä pitoisuuksia perus- ja aspiriinilla käsitellyissä olosuhteissa sekä hoidon jälkeen. -perustason muutos. Lopuksi, kolmas analyysitaso sisältää kunkin tutkimuspopulaation testaamisen COX-1:n aspiriiniadduktin määrien erojen suhteen ryhmien välillä, joilla on äärimmäiset RBC n-3 PUFA -fenotyypit. Tutkijat testaavat verihiutaleiden aggregaatiotestitulosten ja verihiutaleiden aktivaation biokemiallisten mittareiden välisiä yhteyksiä kukin tutkimuspopulaatio erikseen ja yhdessä.

Tutkijat käyttävät lineaarisia regressiomalleja testatakseen yhteyttä yleisten CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- ja ACTN1-genotyyppien ja keskimääräisten absoluuttisten verihiutaleiden aggregaatiotestin tulosten välillä perus- ja aspiriinilla hoidetuissa olosuhteissa sekä hoidon jälkeen. verihiutaleiden aggregaation lähtötilanteen muutos. Tutkivassa analyysissä tutkijat soveltavat Linear Mixed Effects (LME) -malleja yhdistettyyn hoitoa edeltävään ja jälkeiseen tietojoukkoon testatakseen yhteyksiä n-3 PUFA:iden ryhmään ja lääkevaikutuksiin sekä tunnistaakseen mahdolliset muutokset näissä vaikutuksissa. CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- ja ACTN1-variaatioilla sisällyttämällä ja testaamalla merkittäviä yhteisvaikutuksia malleihin. Tutkijat sisällyttävät satunnaiset vaikutukset LME:hen ottaakseen huomioon mahdollisen heterogeenisyyden kussakin populaatiossa.