Генетические и диетические предикторы антитромбоцитарного ответа

Цель: с этой целью исследователи проверят гипотезу о том, что n-3 ПНЖК модифицируют антиагрегантный ответ на аспирин, путем измерения и сравнения трех различных показателей ответа на аспирин у лиц с чрезвычайно высоким и низким уровнем n-3 ПНЖК в эритроцитах при исходное состояние и после 1-недельного приема аспирина один раз в день. Тремя индикаторами являются: 1) концентрация тромбоцитов TXB2 и 20-HETE; 2) агрегация тромбоцитов ex vivo (в ответ на внешние раздражители); и 3) аспириновый ковалентный аддукт ЦОГ-1. Исследователи также проверят, связаны ли распространенные варианты в генах CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 и ACTN1 с базальными и аспирин-индуцированными изменениями в агрегации тромбоцитов и, в предварительном анализе, модифицируют эффекты n-3 ПНЖК на реакция на аспирин.

Процедуры и популяция. Исследователи из Университета Монтаны, Southcentral Foundation и Орегонского университета здравоохранения и науки наберут в общей сложности 150 человек (по 50 в каждом центре) для участия в исследовании. На каждом месте выступления набранные участники будут представлять 25 человек с высокими и 25 человек с низкими концентрациями n-3 ПНЖК в эритроцитах. После предоставления письменного согласия каждый участник исследования будет проверен на предмет истории болезни и клинических лабораторных анализов, чтобы обеспечить хорошее здоровье и хорошие параметры печени, почек и анализов крови. Если будет установлено, что он соответствует требованиям, каждый участник предоставит образцы крови после 12-часового голодания (в течение ночи) для выделения плазмы, тромбоцитов, лимфоцитов и эритроцитов. Отдельный образец крови будет собран в обработанную цитратом пробирку для тестирования агрегации тромбоцитов с использованием платформы PFA-100. Выделенные фракции крови будут храниться при температуре -80°C.

После исходного отбора проб каждому участнику дадут шесть доз аспирина (80 мг/день в течение 2 дней) и проинструктируют принимать одну дозу в день примерно в 9 часов утра. На следующий день после последней дозы аспирина участник предоставит образцы крови для повторного тестирования агрегации тромбоцитов, анализа липидов тромбоцитов и измерения ковалентного присоединения аспирина к ЦОГ-1, а также образец мочи для подтверждения потребления аспирина путем тестирования на салицилат. За 24 часа до тестирования на агрегацию тромбоцитов участников исследования попросят избегать продуктов, которые могут привести к ложным результатам теста (например, шоколад, чай, кофе, кола, красное вино, пиво, помидоры, виноград, виноградный сок, апельсин и клюква). соки, а также традиционные дикорастущие продукты, в том числе ягоды, корни растений, зелень растений и т. д.).

Аналитические методы. Тестирование цельной крови, мест оказания медицинской помощи, агрегации тромбоцитов будет проводиться с использованием автоматизированного прибора PFA-100. Производительность исследовательского персонала будет сравниваться непосредственно с услугами клинического тестирования в каждом центре в качестве меры контроля качества. В каждой тестовой постановке исследователи получат дубликаты результатов как для картриджей с коллагеном/адреналином, так и для картриджей с коллагеном/АДФ. Исследователи также будут измерять концентрации тромбоцитов TXB2, 20-HETE и AA с помощью ЖХ-МС/МС. Кроме того, исследователи разработают и применят метод количественного определения ковалентного аддукта ЦОГ-1 аспирина в изолированных тромбоцитах участников исследования.

Статистические методы. Для каждой исследуемой популяции и подгрупп с экстремальными фенотипами n-3 ПНЖК в эритроцитах исследователи будут использовать модели линейной регрессии с надежными стандартными ошибками для выявления значительных различий в средних результатах теста абсолютной агрегации тромбоцитов в исходных условиях и при лечении аспирином ( первичный результат), а также изменение агрегации тромбоцитов после лечения до исходного уровня. Неоднородность между парами подгрупп с экстремальными фенотипами будет учитываться путем включения пола, возраста, ИМТ и количества тромбоцитов в качестве ковариант в регрессионной модели. Расчет размера выборки для каждого рабочего места (n = 25 на подгруппу n-3 ПНЖК) был основан на мощности не менее 0,8 для обнаружения разницы в средней агрегации тромбоцитов между двумя крайними (0-10 и 90-100 процентилей) n -3 подгруппы ПНЖК в исходных условиях при уровне значимости 0,05. В качестве вторичного уровня анализа для каждой подгруппы экстремальных фенотипов n-3 ПНЖК в эритроцитах исследователи также будут сравнивать средние концентрации TXB2 и 20-HETE в тромбоцитах в исходных условиях и в условиях лечения аспирином, а также после лечения до - базовое изменение. Наконец, третий уровень анализа будет включать в себя тестирование каждой исследуемой популяции на наличие различий в степени аддукта аспирина к ЦОГ-1 между группами с экстремальными фенотипами RBC n-3 PUFA. Исследователи проверят связь между результатами теста на агрегацию тромбоцитов и биохимическими показателями активации тромбоцитов для каждой изучаемой популяции отдельно и в совокупности.

Исследователи будут использовать модели линейной регрессии для проверки связи между общими генотипами CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 и ACTN1 и средними результатами теста абсолютной агрегации тромбоцитов в исходных условиях и при лечении аспирином, а также в период после лечения до начала лечения. исходное изменение агрегации тромбоцитов. В предварительном анализе исследователи будут применять модели линейных смешанных эффектов (LME) к комбинированному набору данных до и после лечения, чтобы проверить связь с группой n-3 ПНЖК и эффектами лекарств, а также выявить любые модификации этих эффектов. с помощью вариаций CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 и ACTN1 путем включения и тестирования значительных эффектов взаимодействия в моделях. Исследователи будут включать случайные эффекты в LME, чтобы учесть потенциальную неоднородность в каждой из популяций.