A vérlemezke-ellenes válasz genetikai és étrendi előrejelzői

Cél: E cél érdekében a kutatók tesztelni fogják azt a hipotézist, miszerint az n-3 PUFA-k módosítják az aszpirin thrombocyta-aggregáció-ellenes reakcióját, három különböző aszpirinreakció-mutató mérésével és összehasonlításával olyan egyéneknél, akiknél rendkívül magas és alacsony vörösvértestek n-3 PUFA-szintje van. alapállapot és 1 hetes napi egyszeri aszpirin kezelés után. A három mutató a következő: 1) thrombocyta TXB2 és 20-HETE koncentráció; 2) thrombocyta-aggregáció ex vivo (válaszként külső ingerekre); és 3) a COX-1 kovalens aszpirin adduktja. A kutatók azt is megvizsgálják, hogy a CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 és ACTN1 gének gyakori változatai összefüggésben állnak-e a thrombocyta-aggregáció bazális és aszpirin által kiváltott változásaival, és egy feltáró elemzés során módosítják az n-3 PUFA-k hatásait aszpirin válasz.

Eljárások és népesség: A Montana Egyetem, a Southcentral Foundation és az Oregon Health & Science University kutatói összesen 150 személyt vesznek fel (minden helyszínen 50-et), hogy részt vegyenek a vizsgálatban. Minden egyes előadási helyszínen a toborzott résztvevők 25 magas és 25 alacsony vörösvértest n-3 PUFA-koncentrációjú személyt képviselnek. Az írásos beleegyezés megadása után a vizsgálat minden résztvevőjét átvizsgálják a kórtörténetre és klinikai laboratóriumi vizsgálatokra, hogy biztosítsák a jó egészségi állapotot, valamint a jó máj-, vese- és vérvizsgálati paramétereket. Ha alkalmasnak találják, minden résztvevő 12 órás éheztetett (egy éjszakán át) tartó vérmintát ad a plazma, a vérlemezkék, a limfociták és a vörösvértestek izolálásához. Külön vérmintát veszünk egy citráttal kezelt csőbe a vérlemezke-aggregáció vizsgálatához a PFA-100 platform használatával. Az izolált vérfrakciókat -80°C-on tárolják.

A kiindulási mintavételt követően minden résztvevő hat adag aszpirint kap (80 mg/nap 2 napon keresztül), és azt az utasítást kapja, hogy vegyen be egy adagot naponta körülbelül 9 órakor. Az utolsó aszpirin adag utáni napon a résztvevő vérmintákat ad az ismételt thrombocyta aggregáció vizsgálatához, a vérlemezke lipid elemzéshez és az aszpirin kovalens COX-1 adduktumának méréséhez, valamint egy vizeletmintát az aszpirin fogyasztás szalicilát vizsgálatával történő megerősítésére. A vérlemezke-aggregációs vizsgálat előtt 24 órával a vizsgálat résztvevőit arra kérik, hogy kerüljék azokat az ételeket, amelyek hamis vizsgálati eredményekhez vezethetnek (pl. csokoládé, tea, kávé, kóla, vörösbor, sör, paradicsom, szőlő, szőlőlé, narancs és áfonya gyümölcslevek, valamint hagyományos vadon termő ételek, amelyek bogyókat, növényi gyökereket, növényi zöldeket stb.

Analitikai módszerek: Teljes vér, gondozási pont, vérlemezke-aggregáció vizsgálatot végeznek az automatizált PFA-100 műszerrel. Minőség-ellenőrzési intézkedésként a kutatószemélyzet teljesítményét minden helyszínen összehasonlítják a klinikai vizsgálati szolgáltatásokkal. Mindegyik tesztbeállításnál a vizsgálók kettős eredményeket kapnak mind a kollagén/epinefrin, mind a kollagén/ADP patronok esetében. A kutatók a vérlemezkék TXB2-, 20-HETE- és AA-koncentrációit is mérik LC-MS/MS-sel. Ezenkívül a kutatók kidolgoznak és alkalmaznak egy módszert a COX-1 kovalens aszpirin adduktjának mennyiségi meghatározására a vizsgálat résztvevőitől származó izolált vérlemezkékben.

Statisztikai módszerek: Minden egyes vizsgálati populációra és az extrém vörösvértestek n-3 PUFA fenotípusú alcsoportjaira a kutatók lineáris regressziós modelleket használnak robusztus standard hibákkal, hogy azonosítsák az átlagos abszolút vérlemezke-aggregációs teszteredmények szignifikáns különbségeit alap- és aszpirinnel kezelt körülmények között. elsődleges kimenetel), valamint a thrombocyta-aggregáció kezelés utáni kiindulási változása. Az extrém fenotípusú alcsoportok párjai közötti heterogenitást a nem, az életkor, a BMI és a thrombocytaszám kovariánsként való bevonásával vesszük figyelembe a regressziós modellben. A minta méretének kiszámítása minden egyes teljesítményhelyre (n = 25 n-3 PUFA alcsoportonként) azon alapult, hogy legalább 0,8 volt a két szélsőséges (0-10 és 90-100 percentilis) n közötti átlagos vérlemezke-aggregáció különbségének kimutatására szolgáló teljesítmény. -3 PUFA alcsoport alapkörülmények között, 0,05 szignifikancia szinten. Az elemzés másodlagos szintjeként az extrém RBC n-3 PUFA fenotípusok minden egyes alcsoportja esetében a kutatók összehasonlítják a vérlemezke TXB2 és 20-HETE átlagos koncentrációját alap- és aszpirinnel kezelt körülmények között, valamint az utókezelést. - alapvonal változás. Végül, az elemzés harmadik szintje magában foglalja az egyes vizsgálati populációk tesztelését a COX-1-hez való aszpirin adduktum mértékének különbségére az extrém RBC n-3 PUFA fenotípusú csoportok között. A kutatók megvizsgálják a vérlemezke-aggregációs teszt eredményei és a vérlemezke-aktiváció biokémiai mérései közötti összefüggéseket, minden egyes vizsgálati populációt külön-külön és összesítve.

A kutatók lineáris regressziós modelleket használnak a közös CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 és ACTN1 genotípusok és az átlagos abszolút vérlemezke-aggregációs teszteredmények közötti összefüggés tesztelésére alap- és aszpirinnel kezelt körülmények között, valamint a kezelés utáni thrombocyta-aggregáció kiindulási változása. Egy feltáró elemzés során a kutatók a Lineáris vegyes hatások (LME) modelljeit alkalmazzák a kombinált kezelés előtti és utáni adatkészletre, hogy teszteljék az n-3 PUFA-csoporttal és a gyógyszerhatásokkal való összefüggést, valamint azonosítsák e hatások bármilyen módosulását. CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 és ACTN1 variációval, a szignifikáns interakciós hatások bevonásával és tesztelésével a modellekben. A kutatók véletlenszerű hatásokat is figyelembe vesznek az LME-ben, hogy figyelembe vegyék az egyes populációk lehetséges heterogenitását.