Genetiske og kostholdsprediktorer for anti-blodplaterespons

Formål: I dette målet vil etterforskerne teste hypotesen om at n-3 PUFA modifiserer aspirin anti-blodplaterespons, ved å måle og sammenligne tre forskjellige indikatorer på aspirinrespons hos individer med ekstremt høye og lave RBC n-3 PUFA-nivåer, under en basal tilstand og etter 1 uke med aspirinbehandling én gang daglig. De tre indikatorene er: 1) blodplate-TXB2- og 20-HETE-konsentrasjoner; 2) blodplateaggregering ex vivo (som respons på ytre stimuli); og 3) aspirin kovalent addukt av COX-1. Forskerne vil også teste om vanlige varianter i CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- og ACTN1-genene er assosiert med basal- og aspirininduserte endringer i blodplateaggregering og, i en utforskende analyse, modifisere effekten av n-3 PUFAer på aspirinrespons.

Prosedyrer og populasjon: Etterforskere fra University of Montana, Southcentral Foundation og Oregon Health & Science University vil rekruttere totalt 150 individer (50 på hvert sted) til å delta i studien. På hvert prestasjonssted vil deltakerne som rekrutteres representere 25 individer med høye og 25 individer med lave RBC n-3 PUFA-konsentrasjoner. Etter å ha gitt skriftlig samtykke, vil hver studiedeltaker bli screenet for medisinsk historie og kliniske laboratorietester for å sikre god helse og gode lever-, nyre- og blodprøveparametere. Hvis det blir funnet å være kvalifisert, vil hver deltaker gi 12-timers faste (over natten) blodprøver for isolering av plasma, blodplater, lymfocytter og røde blodceller. En separat blodprøve vil bli samlet inn i et sitratbehandlet rør for blodplateaggregasjonstesting ved bruk av PFA-100-plattformen. Isolerte blodfraksjoner vil bli lagret ved -80°C.

Etter baseline prøvetaking vil hver deltaker få seks doser aspirin (80 mg/dag i 2 dager) og instruert om å ta én dose daglig ca. kl. 9.00. Dagen etter siste aspirindose vil deltakeren gi blodprøver for gjentatt blodplateaggregasjonstesting, blodplatelipidanalyse og måling av aspirin kovalent addukt til COX-1, og en punkturinprøve for å bekrefte aspirinforbruket ved å teste for salisylat. I 24 timer før blodplateaggregasjonstesting vil studiedeltakerne bli bedt om å unngå matvarer som kan føre til falske testresultater (f.eks. sjokolade, te, kaffe, cola, rødvin, øl, tomat, druer, druejuice, appelsin og tranebær juice, samt tradisjonell villmat som inkluderer bær, planterøtter, plantegrønt osv.).

Analysemetoder: Fullblod, behandlingspunkt, blodplateaggregasjonstesting vil bli utført med det automatiserte PFA-100-instrumentet. Forskningspersonells ytelse vil bli sammenlignet med kliniske testtjenester på hvert sted, som et kvalitetskontrolltiltak. I hver testinnstilling vil etterforskerne oppnå resultater i duplikat for både kollagen/epinefrin og kollagen/ADP-kassetter. Etterforskerne vil også måle konsentrasjoner av blodplater TXB2, 20-HETE og AA ved LC-MS/MS. I tillegg vil etterforskerne utvikle og bruke en metode for å kvantifisere det aspirin-kovalente adduktet av COX-1 i isolerte blodplater fra studiedeltakerne.

Statistiske metoder: For hver studiepopulasjon, og undergrupper med ekstreme RBC n-3 PUFA-fenotyper, vil etterforskerne bruke lineære regresjonsmodeller med robuste standardfeil for å identifisere signifikante forskjeller i gjennomsnittlig absolutt blodplateaggregeringstestresultater under basale og aspirinbehandlede forhold ( primært resultat), så vel som endringen i blodplateaggregering etter behandling til baseline. Heterogenitet mellom par av ekstreme fenotyper undergrupper vil bli gjort rede for ved å inkludere kjønn, alder, BMI og antall blodplater som kovariater i regresjonsmodellen. Prøvestørrelsesberegning for hvert ytelsessted (n = 25 per n-3 PUFA-undergruppe) var basert på å ha en styrke på minst 0,8 for å oppdage en forskjell i gjennomsnittlig blodplateaggregering mellom de to ekstreme (0-10 og 90-100 persentilene) n -3 PUFA-undergrupper under basale forhold, ved et signifikansnivå på 0,05. Som et sekundært analysenivå, for hver undergruppe av de ekstreme RBC n-3 PUFA-fenotypene, vil etterforskerne også sammenligne gjennomsnittlige blodplate-TXB2- og 20-HETE-konsentrasjoner under basal- og aspirinbehandlede forhold, samt etterbehandling-til - grunnlinjeendring. Til slutt vil et tredje analysenivå innebære å teste hver studiepopulasjon for en forskjell i omfanget av aspirinaddukt til COX-1 mellom grupper med ekstreme RBC n-3 PUFA-fenotyper. Etterforskerne vil teste for assosiasjoner mellom blodplateaggregeringstestresultater og biokjemiske mål for blodplateaktivering, hver studiepopulasjon separat og samlet.

Forskerne vil bruke lineære regresjonsmodeller for å teste for en assosiasjon mellom vanlige genotyper CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 og ACTN1 og de gjennomsnittlige absolutte blodplateaggregeringstestresultatene under basal- og aspirinbehandlede forhold, så vel som etterbehandling-til- baseline endring i blodplateaggregering. I en utforskende analyse vil etterforskerne bruke Linear Mixed Effects (LME)-modeller på det kombinerte datasettet før og etter behandling for å teste for assosiasjoner med n-3 PUFA-gruppe- og medikamenteffekter, samt for å identifisere eventuelle modifikasjoner av disse effektene ved CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 og ACTN1 variasjon ved å inkludere og teste for signifikante interaksjonseffekter i modellene. Etterforskerne vil inkludere tilfeldige effekter i LME for å ta hensyn til potensiell heterogenitet i hver av populasjonene.