Genetyczne i dietetyczne predyktory odpowiedzi przeciwpłytkowej

Cel: W tym celu badacze przetestują hipotezę, że PUFA n-3 modyfikują odpowiedź przeciwpłytkową aspiryny, mierząc i porównując trzy różne wskaźniki odpowiedzi aspiryny u osób z bardzo wysokim i niskim poziomem PUFA n-3 w czerwonych krwinkach, pod stan podstawowy i po 1 tygodniu leczenia aspiryną raz dziennie. Te trzy wskaźniki to: 1) stężenie płytkowe TXB2 i 20-HETE; 2) agregacja płytek krwi ex vivo (w odpowiedzi na bodźce zewnętrzne); i 3) kowalencyjny addukt aspiryny z COX-1. Badacze sprawdzą również, czy powszechne warianty genów CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 i ACTN1 są związane z podstawowymi i indukowanymi przez aspirynę zmianami w agregacji płytek krwi oraz, w analizie eksploracyjnej, zmodyfikują wpływ n-3 PUFA na reakcja na aspirynę.

Procedury i populacja: Badacze z University of Montana, Southcentral Foundation i Oregon Health & Science University zrekrutują łącznie 150 osób (po 50 w każdym ośrodku) do udziału w badaniu. W każdym miejscu działania rekrutowani uczestnicy będą reprezentować 25 osób z wysokimi i 25 osobami z niskimi stężeniami RBC n-3 PUFA. Po wyrażeniu pisemnej zgody, każdy uczestnik badania zostanie poddany badaniu przesiewowemu pod kątem historii medycznej i klinicznych badań laboratoryjnych, aby zapewnić dobry stan zdrowia oraz dobre parametry badań wątroby, nerek i krwi. Jeśli okaże się, że kwalifikuje się, każdy uczestnik dostarczy próbki krwi na czczo (przez całą noc) w celu izolacji osocza, płytek krwi, limfocytów i czerwonych krwinek. Oddzielna próbka krwi zostanie pobrana do probówki potraktowanej cytrynianem w celu zbadania agregacji płytek krwi przy użyciu platformy PFA-100. Wyizolowane frakcje krwi będą przechowywane w temperaturze -80°C.

Po początkowym pobraniu próbek, każdy uczestnik otrzyma sześć dawek aspiryny (80 mg/dzień przez 2 dni) i zostanie poinstruowany, aby przyjmować jedną dawkę dziennie około 9 rano. Następnego dnia po przyjęciu ostatniej dawki aspiryny uczestnik dostarczy próbki krwi do powtórnego badania agregacji płytek krwi, analizy lipidów płytek krwi i pomiaru kowalencyjnego adduktu aspiryny z COX-1 oraz punktową próbkę moczu w celu potwierdzenia spożycia aspiryny poprzez badanie na obecność salicylanów. Przez 24 godziny przed badaniem agregacji płytek krwi uczestnicy badania zostaną poproszeni o unikanie pokarmów, które mogą prowadzić do fałszywych wyników testu (np. czekolady, herbaty, kawy, coli, czerwonego wina, piwa, pomidorów, winogron, soku winogronowego, pomarańczy i żurawiny) soki, a także tradycyjne dzikie potrawy, takie jak jagody, korzenie roślin, zielone rośliny itp.).

Metody analityczne: Badanie agregacji płytek krwi pełnej w miejscu opieki zostanie przeprowadzone przy użyciu automatycznego aparatu PFA-100. Wyniki personelu badawczego będą bezpośrednio porównywane z usługami badań klinicznych w każdym ośrodku, jako środek kontroli jakości. W każdym ustawieniu testu badacze uzyskają podwójne wyniki zarówno dla wkładów z kolagenem/epinefryną, jak i kolagenem/ADP. Badacze zmierzą również stężenia TXB2, 20-HETE i AA w płytkach krwi metodą LC-MS/MS. Ponadto badacze opracują i zastosują metodę ilościowego oznaczania kowalencyjnego adduktu aspiryny z COX-1 w izolowanych płytkach krwi od uczestników badania.

Metody statystyczne: Dla każdej badanej populacji i podgrup z ekstremalnymi fenotypami RBC n-3 PUFA badacze wykorzystają modele regresji liniowej z solidnymi błędami standardowymi, aby zidentyfikować istotne różnice w średnich bezwzględnych wynikach testu agregacji płytek krwi w warunkach podstawowych i leczonych aspiryną ( pierwszorzędowy punkt końcowy), jak również zmianę agregacji płytek krwi do stanu wyjściowego po leczeniu. Heterogeniczność między parami skrajnych podgrup fenotypów zostanie uwzględniona poprzez włączenie płci, wieku, BMI i liczby płytek krwi jako współzmiennych w modelu regresji. Obliczenie wielkości próby dla każdego miejsca działania (n = 25 na n-3 podgrupy PUFA) opierało się na posiadaniu mocy co najmniej 0,8 do wykrycia różnicy w średniej agregacji płytek krwi między dwoma skrajnymi wartościami (0-10 i 90-100 percentyli) n -3 podgrupy PUFA w warunkach podstawowych, na poziomie istotności 0,05. Jako drugorzędny poziom analizy, dla każdej podgrupy skrajnych fenotypów RBC n-3 PUFA, badacze porównają również średnie stężenia TXB2 i 20-HETE w płytkach w warunkach podstawowych i leczonych aspiryną, a także po leczeniu do -zmiana linii bazowej. Wreszcie, trzeci poziom analizy będzie obejmował testowanie każdej badanej populacji pod kątem różnic w zakresie adduktu aspiryny do COX-1 między grupami z ekstremalnymi fenotypami RBC n-3 PUFA. Badacze przetestują powiązania między wynikami testu agregacji płytek krwi a biochemicznymi pomiarami aktywacji płytek krwi w każdej badanej populacji osobno i łącznie.

Badacze wykorzystają modele regresji liniowej do zbadania związku między powszechnymi genotypami CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 i ACTN1 a średnimi bezwzględnymi wynikami testu agregacji płytek krwi w warunkach podstawowych i leczonych aspiryną, a także w okresie po leczeniu do wyjściowa zmiana agregacji płytek krwi. W analizie eksploracyjnej badacze zastosują modele Linear Mixed Effects (LME) do połączonego zestawu danych przed i po leczeniu, aby przetestować powiązania z grupami PUFA n-3 i efektami leków, a także zidentyfikować wszelkie modyfikacje tych efektów przez zmienność CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 i ACTN1 poprzez włączenie i przetestowanie znaczących efektów interakcji w modelach. Badacze uwzględnią losowe efekty w LME, aby uwzględnić potencjalną heterogeniczność w każdej z populacji.