항혈소판 반응의 유전 및 식이 예측인자

목적: 이 목적에서 연구자들은 n-3 PUFA가 아스피린 항혈소판 반응을 수정한다는 가설을 테스트할 것입니다. 기초 상태 및 1주일 후 1일 1회 아스피린 치료. 세 가지 지표는 다음과 같습니다. 1) 혈소판 TXB2 및 20-HETE 농도; 2) 체외 혈소판 응집(외부 자극에 대한 반응으로); 및 3) COX-1의 아스피린 공유 부가물. 조사관은 또한 CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 및 ACTN1 유전자의 일반적인 변이가 혈소판 응집의 기초 및 아스피린 유발 변화와 관련이 있는지 여부를 테스트하고 탐색적 분석에서 n-3 PUFA가 다음에 미치는 영향을 수정합니다. 아스피린 반응.

절차 및 모집단: 몬타나 대학교, 사우스센트럴 재단 및 오레곤 건강 과학 대학교의 조사관은 연구에 참여할 총 150명의 개인(각 사이트에서 50명)을 모집할 것입니다. 각 공연 현장에서 모집된 참가자는 RBC n-3 PUFA 농도가 높은 25명과 낮은 25명의 개인을 대표합니다. 서면 동의를 제공한 후, 각 연구 참가자는 건강과 간, 신장 및 혈액 검사 매개변수가 양호한지 확인하기 위해 병력 및 임상 실험실 테스트를 위해 선별됩니다. 자격이 있는 것으로 확인되면 각 참가자는 혈장, 혈소판, 림프구 및 적혈구 분리를 위해 12시간 금식(하룻밤) 혈액 샘플을 제공합니다. PFA-100 플랫폼을 사용하여 혈소판 응집 테스트를 위해 별도의 혈액 샘플을 구연산염 처리 튜브에 수집합니다. 분리된 혈액 분획은 -80°C에서 보관됩니다.

기본 샘플링 후, 각 참가자는 아스피린 6회 용량(2일 동안 80mg/일)을 제공받고 대략 오전 9시에 매일 1회 용량을 복용하도록 지시받습니다. 마지막 아스피린 투여 다음 ​​날 참가자는 반복 혈소판 응집 검사, 혈소판 지질 분석 및 COX-1에 대한 아스피린 공유결합 부가물의 측정을 위한 혈액 샘플을 제공하고, 살리실레이트 테스트를 통해 아스피린 소비를 확인하기 위한 스팟 소변 샘플을 제공합니다. 혈소판 응집 검사 전 24시간 동안 연구 참가자는 가짜 검사 결과로 이어질 수 있는 음식(예: 초콜릿, 차, 커피, 콜라, 적포도주, 맥주, 토마토, 포도, 포도 주스, 오렌지 및 크랜베리)을 피하도록 요청받습니다. 주스뿐만 아니라 장과, 식물 뿌리, 식물 채소 등을 포함하는 전통적인 야생 식품).

분석 방법: 자동화된 PFA-100 기기를 사용하여 전혈, 현장 진료, 혈소판 응집 검사를 수행합니다. 연구 인력의 성과는 품질 관리 조치로 각 현장에서 임상 테스트 서비스와 정면으로 비교됩니다. 각 테스트 설정에서 조사관은 콜라겐/에피네프린 및 콜라겐/ADP 카트리지 모두에 대해 중복 결과를 얻습니다. 조사관은 또한 LC-MS/MS로 혈소판 TXB2, 20-HETE 및 AA 농도를 측정합니다. 또한 조사관은 연구 참가자의 분리된 혈소판에서 COX-1의 테아스피린 공유 결합 부가물을 정량화하는 방법을 개발하고 사용할 것입니다.

통계적 방법: 각 연구 모집단 및 극단적인 RBC n-3 PUFA 표현형이 있는 하위 그룹에 대해 조사관은 강력한 표준 오류가 있는 선형 회귀 모델을 사용하여 기본 및 아스피린 처리 조건에서 평균 절대 혈소판 응집 테스트 결과의 유의미한 차이를 식별합니다. 1차 결과), 혈소판 응집의 치료 후 베이스라인 변화. 회귀 모델에서 성별, 연령, BMI 및 혈소판 수를 공변량으로 포함하여 극단적인 표현형 하위 그룹 쌍 간의 이질성을 설명합니다. 각 성능 사이트(n-3 PUFA 하위 그룹당 n = 25)에 대한 샘플 크기 계산은 두 극단(0-10 및 90-100 백분위수) 사이의 평균 혈소판 응집의 차이를 감지하기 위해 최소 0.8의 검정력을 갖는 것을 기반으로 합니다. - 0.05의 유의 수준에서 기본 조건 하에서 PUFA 하위 그룹 3개. 분석의 2차 수준으로 극단적인 RBC n-3 PUFA 표현형의 각 하위 그룹에 대해 조사관은 기본 및 아스피린 치료 조건 하에서 평균 혈소판 TXB2 및 20-HETE 농도를 비교할 것입니다. - 기준 변경. 마지막으로 분석의 세 번째 수준은 RBC n-3 PUFA 표현형이 극단적인 그룹 간에 COX-1에 대한 아스피린 부가물 정도의 차이에 대해 각 연구 모집단을 테스트하는 것입니다. 조사관은 혈소판 응집 테스트 결과와 혈소판 활성화의 생화학적 측정 사이의 연관성을 각 연구 모집단에서 개별적으로 그리고 종합적으로 테스트할 것입니다.

연구자들은 선형 회귀 모델을 사용하여 일반적인 CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 및 ACTN1 유전자형과 기초 및 아스피린 치료 조건 하에서 평균 절대 혈소판 응집 테스트 결과 사이의 연관성을 테스트할 것입니다. 혈소판 응집의 기준선 변화. 탐색적 분석에서 조사관은 n-3 PUFA 그룹 및 약물 효과와의 연관성을 테스트하고 이러한 효과의 수정 사항을 식별하기 위해 결합된 치료 전 및 치료 후 데이터 세트에 LME(Linear Mixed Effects) 모델을 적용합니다. CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 및 ACTN1 변형에 의해 모델에 중요한 상호 작용 효과를 포함하고 테스트합니다. 조사관은 각 모집단의 잠재적 이질성을 설명하기 위해 LME에 무작위 효과를 포함할 것입니다.