抗血小板反応の遺伝的および食事的予測因子

目的: この目的で、研究者は、n-3 PUFA がアスピリンの抗血小板反応を変更するという仮説を検証します。基礎状態と1日1回のアスピリン治療の1週間後。 3 つの指標は次のとおりです。1) 血小板 TXB2 および 20-HETE 濃度。 2) ex vivo での血小板凝集 (外部刺激への応答);および 3) COX-1 のアスピリン共有付加物。 研究者はまた、CYP4A11、CYP4F2、CYP4F11、PEAR1、および ACTN1 遺伝子の一般的なバリアントが、血小板凝集の基礎およびアスピリン誘発性の変化に関連しているかどうかをテストし、探索的分析で、アスピリン反応。

手順と人口: モンタナ大学、サウスセントラル財団、およびオレゴン健康科学大学の研究者は、研究に参加するために合計 150 人 (各サイトで 50 人) を募集します。 各パフォーマンス サイトで、募集された参加者は、RBC n-3 PUFA 濃度が高い 25 人と低い 25 人を表します。 書面による同意を提供した後、各研究参加者は、病歴と臨床検査室でスクリーニングされ、健康と肝臓、腎臓、および血液検査のパラメーターが良好であることを確認します。 適格であることが判明した場合、各参加者は、血漿、血小板、リンパ球、および赤血球を分離するために、12 時間絶食 (一晩) した血液サンプルを提供します。 PFA-100プラットフォームを使用した血小板凝集試験のために、別の血液サンプルをクエン酸処理チューブに採取します。 分離された血液分画は-80℃で保存されます。

ベースラインサンプリング後、各参加者にはアスピリンを 6 回投与し (80 mg/日を 2 日間)、毎日午前 9 時頃に 1 回服用するように指示します。 最後のアスピリン投与の翌日、参加者は、血小板凝集試験、血小板脂質分析、COX-1へのアスピリン共有結合付加物の測定のために血液サンプルを提供し、サリチル酸をテストしてアスピリンの消費を確認するためのスポット尿サンプルを提供します。 血小板凝集検査の 24 時間前から、研究参加者は誤った検査結果につながる可能性のある食品 (チョコレート、紅茶、コーヒー、コーラ、赤ワイン、ビール、トマト、ブドウ、ブドウジュース、オレンジ、クランベリーなど) を避けるよう求められます。ジュース、ベリー、植物の根、植物の葉などを含む伝統的な野生の食べ物）。

分析方法: 自動化された PFA-100 機器を使用して、全血、ポイント オブ ケア、血小板凝集検査を実施します。 研究担当者によるパフォーマンスは、品質管理手段として、各施設の臨床試験サービスと比較されます。 各テスト設定では、研究者は、コラーゲン/エピネフリンとコラーゲン/ADP カートリッジの両方の結果を複製して取得します。 研究者は、LC-MS/MS によって、血小板 TXB2、20-HETE、および AA 濃度も測定します。 さらに、研究者は、研究参加者から分離された血小板中の COX-1 のテアスピリン共有付加物を定量化する方法を開発し、採用します。

統計的方法: 各研究集団、および極度の RBC n-3 PUFA 表現型を持つサブグループについて、研究者は、堅牢な標準誤差を持つ線形回帰モデルを使用して、基礎およびアスピリン治療条件下での平均絶対血小板凝集試験結果の有意差を特定します (主要な結果)、および血小板凝集の治療後からベースラインへの変化。 極端な表現型サブグループのペア間の不均一性は、回帰モデルの共変量として性別、年齢、BMI、および血小板数を含めることによって説明されます。 各パフォーマンス サイトのサンプル サイズの計算 (n-3 PUFA サブグループあたり n = 25) は、2 つの極値 (0 ～ 10 および 90 ～ 100 パーセンタイル) 間の平均血小板凝集の差を検出する検出力が少なくとも 0.8 であることに基づいていました。 n - 0.05 の有意水準で、基礎条件下で 3 つの PUFA サブグループ。 二次レベルの分析として、極端な RBC n-3 PUFA 表現型の各サブグループについて、研究者は、基礎およびアスピリン治療条件下での平均血小板 TXB2 および 20-HETE 濃度、ならびに治療後の平均値も比較します。 -ベースラインの変更。 最後に、第 3 レベルの分析では、極端な RBC n-3 PUFA 表現型を持つグループ間の COX-1 へのアスピリン付加物の程度の違いについて、各研究集団をテストします。 治験責任医師は、血小板凝集試験の結果と血小板活性化の生化学的測定値との間の関連性を試験し、各試験集団を別々に、また総計で試験します。

研究者は、線形回帰モデルを使用して、一般的な CYP4A11、CYP4F2、CYP4F11、PEAR1、および ACTN1 遺伝子型と、基礎およびアスピリン治療条件下での平均絶対血小板凝集試験結果、および治療後の平均値との関連性をテストします。血小板凝集のベースライン変化。 探索的分析では、研究者は線形混合効果 (LME) モデルを組み合わせた治療前と治療後のデータセットに適用して、n-3 PUFAs グループと薬物効果との関連性をテストし、それらの効果の変更を特定します。 CYP4A11、CYP4F2、CYP4F11、PEAR1、および ACTN1 の変動によるモデルへの有意な相互作用効果の組み込みとテスト。 研究者は、各集団における潜在的な不均一性を説明するために、LME にランダム効果を含めます。