Genetische en voedingsvoorspellers van anti-bloedplaatjesrespons

Doel: In dit doel zullen de onderzoekers de hypothese testen dat n-3 PUFA's de aspirine-antibloedplaatjesrespons wijzigen, door drie verschillende indicatoren van aspirinerespons te meten en te vergelijken bij personen met extreem hoge en lage RBC n-3 PUFA-niveaus, onder een basale toestand en na 1 week van eenmaal daagse aspirinebehandeling. De drie indicatoren zijn: 1) bloedplaatjes TXB2- en 20-HETE-concentraties; 2) aggregatie van bloedplaatjes ex vivo (als reactie op externe prikkels); en 3) aspirine covalent adduct van COX-1. De onderzoekers zullen ook testen of gemeenschappelijke varianten in de CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- en ACTN1-genen al dan niet geassocieerd zijn met basale en aspirine-geïnduceerde veranderingen in bloedplaatjesaggregatie en, in een verkennende analyse, de effecten van n-3 PUFA's op aspirine reactie.

Procedures en populatie: Onderzoekers van de University of Montana, Southcentral Foundation en Oregon Health & Science University zullen in totaal 150 personen rekruteren (50 op elke locatie) om deel te nemen aan het onderzoek. Op elke prestatielocatie vertegenwoordigen de geworven deelnemers 25 personen met hoge en 25 personen met lage RBC n-3 PUFA-concentraties. Na schriftelijke toestemming wordt elke studiedeelnemer gescreend op medische geschiedenis en klinische laboratoriumtests om een ​​goede gezondheid en goede lever-, nier- en bloedtestparameters te garanderen. Als blijkt dat elke deelnemer in aanmerking komt, zal elke deelnemer gedurende 12 uur nuchtere ('s nachts) bloedmonsters verstrekken voor isolatie van plasma, bloedplaatjes, lymfocyten en rode bloedcellen. Er wordt een afzonderlijk bloedmonster afgenomen in een met citraat behandeld buisje voor bloedplaatjesaggregatietesten met behulp van het PFA-100-platform. Geïsoleerde bloedfracties worden bewaard bij -80°C.

Na baseline-bemonstering krijgt elke deelnemer zes doses aspirine (80 mg / dag gedurende 2 dagen) en wordt hij geïnstrueerd om dagelijks om ongeveer 9.00 uur één dosis in te nemen. Op de dag na de laatste dosis aspirine levert de deelnemer bloedmonsters voor herhaalde bloedplaatjesaggregatietesten, analyse van bloedplaatjeslipiden en meting van aspirine covalent adduct aan COX-1, en een spot-urinemonster om aspirineconsumptie te bevestigen door te testen op salicylaat. Gedurende 24 uur voorafgaand aan de bloedplaatjesaggregatietest zullen de deelnemers aan de studie worden gevraagd om voedsel te vermijden dat zou kunnen leiden tot onechte testresultaten (bijv. chocolade, thee, koffie, cola, rode wijn, bier, tomaat, druiven, druivensap, sinaasappel- en cranberry sappen, evenals traditioneel wild voedsel dat bessen, plantenwortels, plantengroen enz.

Analytische methoden: volbloed-, point-of-care- en bloedplaatjesaggregatietesten worden uitgevoerd met behulp van het geautomatiseerde PFA-100-instrument. De prestaties van het onderzoekspersoneel zullen op elke locatie worden vergeleken met de klinische testdiensten, als maatregel voor kwaliteitscontrole. In elke testomgeving zullen de onderzoekers resultaten in tweevoud verkrijgen voor zowel collageen/epinefrine- als collageen/ADP-cartridges. De onderzoekers zullen ook bloedplaatjes TXB2-, 20-HETE- en AA-concentraties meten met LC-MS/MS. Daarnaast zullen de onderzoekers een methode ontwikkelen en toepassen om het aspirine covalente adduct van COX-1 in geïsoleerde bloedplaatjes van studiedeelnemers te kwantificeren.

Statistische methoden: Voor elke onderzoekspopulatie en subgroepen met extreme RBC n-3 PUFA-fenotypes zullen de onderzoekers lineaire regressiemodellen met robuuste standaardfouten gebruiken om significante verschillen te identificeren in de gemiddelde absolute bloedplaatjesaggregatietestresultaten onder basale en met aspirine behandelde omstandigheden ( primaire uitkomstmaat), evenals de verandering in bloedplaatjesaggregatie na de behandeling ten opzichte van de uitgangswaarde. Heterogeniteit tussen paren subgroepen met extreme fenotypes zal worden verklaard door het opnemen van geslacht, leeftijd, BMI en aantal bloedplaatjes als covariaten in het regressiemodel. De berekening van de steekproefomvang voor elke prestatieplaats (n = 25 per n-3 PUFA-subgroep) was gebaseerd op een power van ten minste 0,8 voor het detecteren van een verschil in gemiddelde bloedplaatjesaggregatie tussen de twee extreme (0-10 en 90-100 percentielen) n -3 PUFA-subgroepen onder basale omstandigheden, met een significantieniveau van 0,05. Als secundair analyseniveau zullen de onderzoekers voor elke subgroep van de extreme RBC n-3 PUFA-fenotypes ook de gemiddelde bloedplaatjes-TXB2- en 20-HETE-concentraties onder basale en aspirine-behandelde omstandigheden vergelijken, evenals de post-behandeling-tot - basislijn verandering. Ten slotte omvat een derde analyseniveau het testen van elke onderzoekspopulatie op een verschil in de mate van aspirine-adduct aan COX-1 tussen groepen met extreme RBC n-3 PUFA-fenotypes. De onderzoekers zullen testen op associaties tussen de resultaten van de bloedplaatjesaggregatietest en biochemische metingen van bloedplaatjesactivering, elke studiepopulatie afzonderlijk en in totaal.

De onderzoekers zullen lineaire regressiemodellen gebruiken om te testen op een associatie tussen veelvoorkomende CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- en ACTN1-genotypes en de gemiddelde absolute bloedplaatjesaggregatietestresultaten onder basale en met aspirine behandelde omstandigheden, evenals de post-treatment-to- baseline verandering in bloedplaatjesaggregatie. In een verkennende analyse zullen de onderzoekers Linear Mixed Effects (LME)-modellen toepassen op de gecombineerde dataset voor en na de behandeling om te testen op associaties met n-3 PUFA-groep- en geneesmiddeleffecten, en om eventuele wijzigingen van die effecten te identificeren door CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- en ACTN1-variatie door het opnemen en testen op significante interactie-effecten in de modellen. De onderzoekers zullen willekeurige effecten opnemen in de LME om rekening te houden met mogelijke heterogeniteit in elk van de populaties.