Genetické a dietní prediktory protidestičkové odpovědi

Účel: Za tímto účelem výzkumníci otestují hypotézu, že n-3 PUFA modifikují aspirinovou protidestičkovou odpověď, měřením a porovnáním tří různých indikátorů aspirinové odpovědi u jedinců s extrémně vysokými a nízkými hladinami RBC n-3 PUFA za bazálního stavu a po 1 týdnu léčby jednou denně aspirinem. Tyto tři indikátory jsou: 1) koncentrace krevních destiček TXB2 a 20-HETE; 2) agregace krevních destiček ex vivo (v reakci na vnější podněty); a 3) aspirinový kovalentní adukt COX-1. Vyšetřovatelé budou také testovat, zda běžné varianty v genech CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 a ACTN1 jsou spojeny s bazálními a aspirinem indukovanými změnami v agregaci krevních destiček a v průzkumné analýze modifikují účinky n-3 PUFA na odpověď na aspirin.

Postupy a populace: Výzkumníci z University of Montana, Southcentral Foundation a Oregon Health & Science University přijmou celkem 150 jedinců (50 na každém místě), aby se zúčastnili studie. Na každém místě výkonu budou rekrutovaní účastníci představovat 25 jedinců s vysokými a 25 jedinců s nízkými koncentracemi červených krvinek n-3 PUFA. Po poskytnutí písemného souhlasu bude každý účastník studie vyšetřen na anamnézu a klinické laboratorní testy, aby se zajistilo dobré zdraví a dobré parametry jaterních, ledvinových a krevních testů. Pokud bude shledán způsobilým, každý účastník poskytne 12hodinové vzorky krve na lačno (přes noc) pro izolaci plazmy, krevních destiček, lymfocytů a červených krvinek. Oddělený vzorek krve bude odebrán do zkumavky ošetřené citrátem pro testování agregace krevních destiček pomocí platformy PFA-100. Izolované krevní frakce budou skladovány při -80 °C.

Po základním odběru vzorků dostane každý účastník šest dávek aspirinu (80 mg/den po dobu 2 dnů) a instruuje, aby si vzal jednu dávku denně přibližně v 9 hodin. Den po poslední dávce aspirinu účastník poskytne vzorky krve pro opakované testování agregace krevních destiček, analýzu lipidů krevních destiček a měření kovalentního aduktu aspirinu na COX-1 a vzorek moči pro potvrzení spotřeby aspirinu testováním na salicylát. Po dobu 24 hodin před testováním agregace krevních destiček budou účastníci studie požádáni, aby se vyvarovali potravin, které by mohly vést k falešným výsledkům testu (např. čokoláda, čaj, káva, cola, červené víno, pivo, rajčata, hrozny, hroznová šťáva, pomeranč a brusinky šťávy, stejně jako tradiční divoké potraviny, které zahrnují bobule, kořeny rostlin, rostlinnou zeleninu atd.).

Analytické metody: Plná krev, bod péče, testování agregace krevních destiček bude provedeno pomocí automatického přístroje PFA-100. Výkon výzkumného personálu bude porovnán přímo na místě se službami klinického testování na každém místě jako opatření kontroly kvality. V každém nastavení testu výzkumníci získají výsledky v duplikátech pro kolagen/adrenalin a kolagen/ADP kazety. Vyšetřovatelé budou také měřit koncentrace krevních destiček TXB2, 20-HETE a AA pomocí LC-MS/MS. Kromě toho výzkumníci vyvinou a použijí metodu pro kvantifikaci theaspirinového kovalentního aduktu COX-1 v izolovaných krevních destičkách od účastníků studie.

Statistické metody: Pro každou studovanou populaci a podskupiny s extrémními fenotypy červených krvinek n-3 PUFA vědci použijí lineární regresní modely s robustními standardními chybami k identifikaci významných rozdílů ve výsledcích testu průměrné absolutní agregace krevních destiček za bazálních podmínek a podmínek léčby aspirinem ( primární výsledek), stejně jako změna agregace krevních destiček po léčbě oproti výchozí hodnotě. Heterogenita mezi páry podskupin extrémních fenotypů bude vysvětlena zahrnutím pohlaví, věku, BMI a počtu krevních destiček jako kovariát v regresním modelu. Výpočet velikosti vzorku pro každé místo výkonu (n = 25 na n-3 podskupinu PUFA) byl založen na síle alespoň 0,8 pro detekci rozdílu v průměrné agregaci krevních destiček mezi dvěma extrémy (0-10 a 90-100 percentily) n -3 podskupiny PUFA za bazálních podmínek, na hladině významnosti 0,05. Jako sekundární úroveň analýzy, pro každou podskupinu extrémních fenotypů RBC n-3 PUFA, výzkumníci také porovnají průměrné koncentrace krevních destiček TXB2 a 20-HETE za bazálních podmínek a podmínek po léčbě aspirinem, stejně jako po léčbě - změna základní linie. Konečně třetí úroveň analýzy bude zahrnovat testování každé studované populace na rozdíl v rozsahu aduktu aspirinu na COX-1 mezi skupinami s extrémními fenotypy PUFA n-3 červených krvinek. Výzkumníci budou testovat souvislosti mezi výsledky testu agregace krevních destiček a biochemickými měřeními aktivace krevních destiček, každou studovanou populaci samostatně a v souhrnu.

Vyšetřovatelé použijí modely lineární regrese k testování asociace mezi běžnými genotypy CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 a ACTN1 a průměrnými výsledky testu absolutní agregace krevních destiček za bazálních podmínek a podmínek po léčbě aspirinem, stejně jako mezi výsledky po léčbě základní změna v agregaci krevních destiček. V průzkumné analýze vědci použijí modely lineárních smíšených účinků (LME) na kombinovaný soubor dat před a po léčbě, aby otestovali spojitost se skupinou n-3 PUFA a účinky léku, stejně jako identifikovali jakékoli modifikace těchto účinků. variací CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 a ACTN1 zahrnutím a testováním významných interakčních účinků v modelech. Výzkumníci zahrnou náhodné efekty do LME, aby zohlednili potenciální heterogenitu v každé z populací.