Predittori genetici e dietetici della risposta antipiastrinica

Scopo: A questo scopo, i ricercatori verificheranno l'ipotesi che i PUFA n-3 modifichino la risposta antipiastrinica dell'aspirina, misurando e confrontando tre diversi indicatori di risposta all'aspirina in individui con livelli estremamente alti e bassi di PUFA n-3 RBC, sotto un stato basale e dopo 1 settimana di trattamento con aspirina una volta al giorno. I tre indicatori sono: 1) concentrazioni piastriniche di TXB2 e 20-HETE; 2) aggregazione piastrinica ex vivo (in risposta a stimoli esterni); e 3) addotto covalente dell'aspirina di COX-1. Gli investigatori verificheranno anche se varianti comuni nei geni CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 sono associate o meno a cambiamenti basali e indotti dall'aspirina nell'aggregazione piastrinica e, in un'analisi esplorativa, modificheranno gli effetti dei PUFA n-3 su risposta all'aspirina.

Procedure e popolazione: gli investigatori dell'Università del Montana, della Southcentral Foundation e dell'Oregon Health & Science University recluteranno un totale di 150 persone (50 per ogni sito) per partecipare allo studio. In ogni sito di performance, i partecipanti reclutati rappresenteranno 25 individui con alte e 25 individui con basse concentrazioni di PUFA n-3 RBC. Dopo aver fornito il consenso scritto, ogni partecipante allo studio verrà sottoposto a screening per anamnesi e test di laboratorio clinici per garantire una buona salute e buoni parametri di analisi del fegato, dei reni e del sangue. Se ritenuto idoneo, ciascun partecipante fornirà campioni di sangue a digiuno di 12 ore (durante la notte) per l'isolamento di plasma, piastrine, linfociti e globuli rossi. Un campione di sangue separato verrà raccolto in una provetta trattata con citrato per il test di aggregazione piastrinica utilizzando la piattaforma PFA-100. Le frazioni ematiche isolate saranno conservate a -80°C.

Dopo il campionamento al basale, a ciascun partecipante verranno somministrate sei dosi di aspirina (80 mg/giorno per 2 giorni) e gli verrà chiesto di assumere una dose al giorno alle 9:00 circa. Il giorno dopo l'ultima dose di aspirina, il partecipante fornirà campioni di sangue per ripetuti test di aggregazione piastrinica, analisi dei lipidi piastrinici e misurazione dell'addotto covalente dell'aspirina alla COX-1 e un campione di urina spot per confermare il consumo di aspirina mediante test per il salicilato. Per 24 ore prima del test di aggregazione piastrinica, ai partecipanti allo studio verrà chiesto di evitare cibi che potrebbero portare a risultati falsi del test (p. es., cioccolato, tè, caffè, cola, vino rosso, birra, pomodoro, uva, succo d'uva, arancia e mirtillo rosso succhi, così come cibi selvatici tradizionali che includono bacche, radici di piante, verdure di piante ecc.).

Metodi analitici: Sangue intero, point of care, test di aggregazione piastrinica verranno eseguiti utilizzando lo strumento automatizzato PFA-100. Le prestazioni del personale di ricerca saranno confrontate testa a testa con i servizi di test clinici in ciascun sito, come misura di controllo della qualità. In ciascuna impostazione del test, gli investigatori otterranno risultati in duplicato sia per le cartucce di collagene/epinefrina che per le cartucce di collagene/ADP. Gli investigatori misureranno anche le concentrazioni piastriniche di TXB2, 20-HETE e AA, mediante LC-MS/MS. Inoltre, i ricercatori svilupperanno e impiegheranno un metodo per quantificare l'addotto covalente dell'aspirina di COX-1 nelle piastrine isolate dai partecipanti allo studio.

Metodi statistici: per ogni popolazione di studio e sottogruppi con fenotipi RBC n-3 PUFA estremi, i ricercatori utilizzeranno modelli di regressione lineare con errori standard robusti per identificare differenze significative nei risultati medi assoluti del test di aggregazione piastrinica in condizioni basali e trattate con aspirina ( esito primario), così come la variazione post-trattamento rispetto al basale dell'aggregazione piastrinica. L'eterogeneità tra coppie di sottogruppi di fenotipi estremi sarà spiegata includendo sesso, età, BMI e conta piastrinica come covariate nel modello di regressione. Il calcolo della dimensione del campione per ciascun sito di performance (n = 25 per sottogruppo n-3 PUFA) era basato su una potenza di almeno 0,8 per rilevare una differenza nell'aggregazione piastrinica media tra i due estremi (0-10 e 90-100 percentili) n -3 sottogruppi PUFA in condizioni basali, a un livello di significatività di 0,05. Come livello secondario di analisi, per ciascun sottogruppo dei fenotipi estremi di RBC n-3 PUFA, i ricercatori confronteranno anche le concentrazioni medie di piastrine TXB2 e 20-HETE in condizioni basali e trattate con aspirina, così come il post-trattamento-a -cambiamento di base. Infine, un terzo livello di analisi comporterà il test di ciascuna popolazione in studio per una differenza nell'estensione dell'addotto dell'aspirina alla COX-1 tra i gruppi con fenotipi RBC n-3 PUFA estremi. Gli investigatori verificheranno le associazioni tra i risultati del test di aggregazione piastrinica e le misure biochimiche dell'attivazione piastrinica, ciascuna popolazione di studio separatamente e in forma aggregata.

I ricercatori utilizzeranno modelli di regressione lineare per testare un'associazione tra i comuni genotipi CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 e i risultati medi assoluti del test di aggregazione piastrinica in condizioni basali e trattate con aspirina, nonché il post-trattamento a- variazione basale dell'aggregazione piastrinica. In un'analisi esplorativa, i ricercatori applicheranno i modelli di effetti misti lineari (LME) al set di dati combinato pre e post-trattamento per testare le associazioni con il gruppo n-3 PUFA e gli effetti del farmaco, nonché per identificare eventuali modifiche di tali effetti dalla variazione di CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 includendo e testando effetti di interazione significativi nei modelli. Gli investigatori includeranno effetti casuali nel LME per tenere conto della potenziale eterogeneità in ciascuna delle popolazioni.