Predictores genéticos y dietéticos de la respuesta antiplaquetaria

Propósito: Con este objetivo, los investigadores probarán la hipótesis de que los PUFA n-3 modifican la respuesta antiplaquetaria de la aspirina, midiendo y comparando tres indicadores diferentes de la respuesta a la aspirina en individuos con niveles extremadamente altos y bajos de PUFA n-3 en los glóbulos rojos, bajo un estado basal y después de 1 semana de tratamiento con aspirina una vez al día. Los tres indicadores son: 1) concentraciones plaquetarias de TXB2 y 20-HETE; 2) agregación plaquetaria ex vivo (en respuesta a estímulos externos); y 3) aducto covalente de aspirina de COX-1. Los investigadores también probarán si las variantes comunes en los genes CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 y ACTN1 están asociadas con cambios basales e inducidos por aspirina en la agregación plaquetaria y, en un análisis exploratorio, modifican los efectos de los AGPI n-3 en respuesta a la aspirina.

Procedimientos y Población: Los investigadores de la Universidad de Montana, la Fundación Southcentral y la Universidad de Ciencias y Salud de Oregón reclutarán un total de 150 personas (50 en cada sitio) para participar en el estudio. En cada sitio de actuación, los participantes reclutados representarán a 25 individuos con concentraciones altas y 25 individuos con concentraciones bajas de AGPI n-3 en glóbulos rojos. Después de dar su consentimiento por escrito, se examinará el historial médico y las pruebas de laboratorio clínico de cada participante del estudio para garantizar una buena salud y buenos parámetros de análisis hepático, renal y sanguíneo. Si se determina que es elegible, cada participante proporcionará muestras de sangre en ayunas (durante la noche) de 12 horas para el aislamiento de plasma, plaquetas, linfocitos y glóbulos rojos. Se recolectará una muestra de sangre separada en un tubo tratado con citrato para la prueba de agregación plaquetaria utilizando la plataforma PFA-100. Las fracciones de sangre aisladas se almacenarán a -80 °C.

Después del muestreo inicial, a cada participante se le administrarán seis dosis de aspirina (80 mg/día durante 2 días) y se le indicará que tome una dosis diaria aproximadamente a las 9 am. El día después de la última dosis de aspirina, el participante proporcionará muestras de sangre para pruebas repetidas de agregación plaquetaria, análisis de lípidos plaquetarios y medición del aducto covalente de aspirina a COX-1, y una muestra de orina para confirmar el consumo de aspirina mediante la prueba de salicilato. Durante las 24 horas previas a la prueba de agregación plaquetaria, se les pedirá a los participantes del estudio que eviten los alimentos que podrían conducir a resultados falsos de la prueba (p. ej., chocolate, té, café, refrescos de cola, vino tinto, cerveza, tomate, uvas, jugo de uva, naranja y arándano). jugos, así como alimentos silvestres tradicionales que incluyen bayas, raíces de plantas, verduras, etc.).

Métodos analíticos: Se realizarán pruebas de agregación de plaquetas, en el punto de atención y de sangre completa utilizando el instrumento automatizado PFA-100. El desempeño del personal de investigación se comparará cabeza a cabeza con los servicios de pruebas clínicas en cada sitio, como medida de control de calidad. En cada entorno de prueba, los investigadores obtendrán resultados por duplicado para los cartuchos de colágeno/epinefrina y colágeno/ADP. Los investigadores también medirán las concentraciones plaquetarias de TXB2, 20-HETE y AA mediante LC-MS/MS. Además, los investigadores desarrollarán y emplearán un método para cuantificar el aducto covalente de aspirina de COX-1 en plaquetas aisladas de los participantes del estudio.

Métodos estadísticos: para cada población de estudio y subgrupos con fenotipos extremos de AGPI n-3 de glóbulos rojos, los investigadores utilizarán modelos de regresión lineal con errores estándar sólidos para identificar diferencias significativas en los resultados medios absolutos de la prueba de agregación plaquetaria en condiciones basales y tratadas con aspirina ( resultado primario), así como el cambio posterior al tratamiento a la línea de base en la agregación plaquetaria. La heterogeneidad entre pares de subgrupos de fenotipos extremos se tendrá en cuenta al incluir el sexo, la edad, el IMC y el recuento de plaquetas como covariables en el modelo de regresión. El cálculo del tamaño de la muestra para cada sitio de rendimiento (n = 25 por subgrupo de AGPI n-3) se basó en tener un poder de al menos 0,8 para detectar una diferencia en la agregación plaquetaria media entre los dos extremos (percentiles 0-10 y 90-100) n -3 subgrupos de PUFA en condiciones basales, a un nivel de significación de 0,05. Como nivel secundario de análisis, para cada subgrupo de fenotipos extremos de AGPI n-3 de glóbulos rojos, los investigadores también compararán las concentraciones plaquetarias medias de TXB2 y 20-HETE en condiciones basales y tratadas con aspirina, así como las concentraciones posteriores al tratamiento. -cambio de línea de base. Finalmente, un tercer nivel de análisis implicará probar cada población de estudio para detectar una diferencia en la extensión del aducto de la aspirina a la COX-1 entre grupos con fenotipos extremos de AGPI n-3 de glóbulos rojos. Los investigadores evaluarán las asociaciones entre los resultados de la prueba de agregación plaquetaria y las medidas bioquímicas de la activación plaquetaria, cada población de estudio por separado y en conjunto.

Los investigadores utilizarán modelos de regresión lineal para probar una asociación entre los genotipos comunes de CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 y ACTN1 y los resultados medios absolutos de la prueba de agregación de plaquetas en condiciones basales y tratadas con aspirina, así como el período posterior al tratamiento. cambio de referencia en la agregación plaquetaria. En un análisis exploratorio, los investigadores aplicarán modelos de efectos mixtos lineales (LME) al conjunto de datos combinados previos y posteriores al tratamiento para evaluar las asociaciones con el grupo de PUFA n-3 y los efectos de las drogas, así como para identificar cualquier modificación de esos efectos. por la variación de CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 y ACTN1 al incluir y probar efectos de interacción significativos en los modelos. Los investigadores incluirán efectos aleatorios en el LME para tener en cuenta la posible heterogeneidad en cada una de las poblaciones.