Genetiske og diætprædiktorer for anti-blodpladerespons

Formål: I dette mål vil efterforskerne teste hypotesen om, at n-3 PUFA'er modificerer aspirin anti-blodpladerespons ved at måle og sammenligne tre forskellige indikatorer for aspirinrespons hos individer med ekstremt høje og lave RBC n-3 PUFA niveauer, under en basal tilstand og efter 1 uges behandling med aspirin én gang dagligt. De tre indikatorer er: 1) blodplade-TXB2- og 20-HETE-koncentrationer; 2) blodpladeaggregation ex vivo (som reaktion på eksterne stimuli); og 3) aspirin covalent addukt af COX-1. Forskerne vil også teste, om almindelige varianter i generne CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 og ACTN1 er associeret med basale og aspirin-inducerede ændringer i blodpladeaggregation og, i en eksplorativ analyse, modificere virkningerne af n-3 PUFA'er på aspirin respons.

Procedurer og befolkning: Efterforskere fra University of Montana, Southcentral Foundation og Oregon Health & Science University vil rekruttere i alt 150 personer (50 på hvert sted) til at deltage i undersøgelsen. På hvert præstationssted vil de rekrutterede deltagere repræsentere 25 individer med høje og 25 individer med lave RBC n-3 PUFA-koncentrationer. Efter at have givet skriftligt samtykke vil hver undersøgelsesdeltager blive screenet for medicinsk historie og klinisk laboratorietestning for at sikre et godt helbred og gode lever-, nyre- og blodprøveparametre. Hvis det viser sig at være kvalificeret, vil hver deltager give 12-timers faste (over natten) blodprøver til isolering af plasma, blodplader, lymfocytter og røde blodlegemer. En separat blodprøve vil blive opsamlet i et citratbehandlet rør til blodpladeaggregeringstest ved brug af PFA-100-platformen. Isolerede blodfraktioner vil blive opbevaret ved -80°C.

Efter baseline prøvetagning vil hver deltager få seks doser aspirin (80 mg/dag i 2 dage) og instrueret i at tage én dosis dagligt ca. kl. 9.00. Dagen efter den sidste aspirindosis vil deltageren give blodprøver til gentagen blodpladeaggregationstestning, blodpladelipidanalyse og måling af aspirin-kovalent addukt til COX-1 og en pleturinprøve for at bekræfte aspirinforbruget ved at teste for salicylat. I 24 timer før blodpladeaggregeringstestning vil undersøgelsens deltagere blive bedt om at undgå fødevarer, der kan føre til falske testresultater (f.eks. chokolade, te, kaffe, cola, rødvin, øl, tomat, vindruer, druejuice, appelsin og tranebær juice, såvel som traditionelle vilde fødevarer, der inkluderer bær, planterødder, plantegrønt osv.).

Analysemetoder: Fuldblod, plejepunkt, blodpladeaggregationstestning vil blive udført ved hjælp af det automatiserede PFA-100-instrument. Forskerpersonalets præstationer vil blive sammenlignet med kliniske testtjenester på hvert sted som en kvalitetskontrolforanstaltning. I hver testindstilling vil efterforskerne opnå resultater i to eksemplarer for både collagen/epinephrin og kollagen/ADP patroner. Efterforskerne vil også måle blodplade-TXB2-, 20-HETE- og AA-koncentrationer ved LC-MS/MS. Derudover vil efterforskerne udvikle og anvende en metode til at kvantificere det aspirin-kovalente addukt af COX-1 i isolerede blodplader fra studiedeltagere.

Statistiske metoder: For hver undersøgelsespopulation og undergrupper med ekstreme RBC n-3 PUFA-fænotyper vil efterforskerne bruge lineære regressionsmodeller med robuste standardfejl til at identificere signifikante forskelle i de gennemsnitlige absolutte blodpladeaggregationstestresultater under basale og aspirinbehandlede forhold ( primært resultat), såvel som ændringen i blodpladeaggregation efter behandling til baseline. Heterogenitet mellem par af ekstreme fænotyper undergrupper vil blive redegjort for ved at inkludere køn, alder, BMI og blodpladetal som kovariater i regressionsmodellen. Prøvestørrelsesberegning for hvert præstationssted (n = 25 pr. n-3 PUFA-undergruppe) var baseret på at have en styrke på mindst 0,8 til påvisning af en forskel i gennemsnitlig blodpladeaggregering mellem de to ekstreme (0-10 og 90-100 percentiler) n -3 PUFA-undergrupper under basale forhold, ved et signifikansniveau på 0,05. Som et sekundært analyseniveau vil forskerne for hver undergruppe af de ekstreme RBC n-3 PUFA-fænotyper også sammenligne gennemsnitlige blodplade-TXB2- og 20-HETE-koncentrationer under basale og aspirin-behandlede forhold, såvel som post-behandling-til -grundlinjeændring. Endelig vil et tredje analyseniveau involvere at teste hver undersøgelsespopulation for en forskel i omfanget af aspirinaddukt til COX-1 mellem grupper med ekstreme RBC n-3 PUFA-fænotyper. Efterforskerne vil teste for sammenhænge mellem blodpladeaggregationstestresultater og biokemiske mål for blodpladeaktivering, hver undersøgelsespopulation separat og samlet.

Forskerne vil bruge lineære regressionsmodeller til at teste for en sammenhæng mellem almindelige CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- og ACTN1-genotyper og de gennemsnitlige absolutte blodpladeaggregeringstestresultater under basale og aspirin-behandlede forhold, såvel som post-behandling-til- baseline ændring i blodpladeaggregation. I en eksplorativ analyse vil efterforskerne anvende Linear Mixed Effects (LME)-modeller på det kombinerede datasæt før og efter behandling for at teste for associationer med n-3 PUFAs gruppe- og lægemiddeleffekter, samt for at identificere eventuelle modifikationer af disse effekter. ved CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 og ACTN1 variation ved at inkludere og teste for signifikante interaktionseffekter i modellerne. Efterforskerne vil inkludere tilfældige effekter i LME for at tage højde for potentiel heterogenitet i hver af populationerne.