Genetische und diätetische Prädiktoren der Anti-Thrombozyten-Reaktion

Zweck: Zu diesem Zweck testen die Forscher die Hypothese, dass n-3-PUFAs die Thrombozytenaggregationshemmung von Aspirin modifizieren, indem sie drei verschiedene Indikatoren der Aspirin-Reaktion bei Personen mit extrem hohen und niedrigen RBC-n-3-PUFA-Spiegeln messen und vergleichen, unter a Grundzustand und nach 1-wöchiger einmal täglicher Aspirin-Behandlung. Die drei Indikatoren sind: 1) Blutplättchen-TXB2- und 20-HETE-Konzentrationen; 2) Thrombozytenaggregation ex vivo (als Reaktion auf externe Stimuli); und 3) kovalentes Aspirin-Addukt von COX-1. Die Forscher werden auch testen, ob gemeinsame Varianten in den Genen CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 und ACTN1 mit basalen und Aspirin-induzierten Veränderungen der Thrombozytenaggregation assoziiert sind, und in einer explorativen Analyse die Wirkungen von n-3-PUFAs auf modifizieren Aspirin-Antwort.

Verfahren und Population: Forscher der University of Montana, der Southcentral Foundation und der Oregon Health & Science University werden insgesamt 150 Personen (50 an jedem Standort) für die Teilnahme an der Studie rekrutieren. An jedem Leistungsort repräsentieren die rekrutierten Teilnehmer 25 Personen mit hohen und 25 Personen mit niedrigen Erythrozyten-n-3-PUFA-Konzentrationen. Nach Erteilung der schriftlichen Zustimmung wird jeder Studienteilnehmer auf Anamnese und klinische Labortests untersucht, um eine gute Gesundheit und gute Leber-, Nieren- und Bluttestparameter sicherzustellen. Wenn dies für geeignet befunden wird, stellt jeder Teilnehmer 12 Stunden lang nüchtern (über Nacht) Blutproben zur Isolierung von Plasma, Blutplättchen, Lymphozyten und roten Blutkörperchen zur Verfügung. Eine separate Blutprobe wird in ein mit Citrat behandeltes Röhrchen für Blutplättchenaggregationstests unter Verwendung der PFA-100-Plattform gesammelt. Isolierte Blutfraktionen werden bei -80 °C gelagert.

Nach der Grundlinienprobenahme erhält jeder Teilnehmer sechs Dosen Aspirin (80 mg/Tag für 2 Tage) und wird angewiesen, täglich gegen 9 Uhr eine Dosis einzunehmen. Am Tag nach der letzten Aspirindosis stellt der Teilnehmer Blutproben für wiederholte Thrombozytenaggregationstests, Thrombozytenlipidanalyse und Messung des kovalenten Addukts von Aspirin an COX-1 sowie eine Urinprobe zur Bestätigung des Aspirinkonsums durch Salicylattest zur Verfügung. 24 Stunden vor dem Thrombozytenaggregationstest werden die Studienteilnehmer gebeten, Lebensmittel zu vermeiden, die zu falschen Testergebnissen führen könnten (z. B. Schokolade, Tee, Kaffee, Cola, Rotwein, Bier, Tomate, Trauben, Traubensaft, Orange und Cranberry). Säfte sowie traditionelle wilde Lebensmittel wie Beeren, Pflanzenwurzeln, Pflanzengrün usw.).

Analysemethoden: Vollblut-, Point-of-Care- und Thrombozytenaggregationstests werden mit dem automatisierten PFA-100-Instrument durchgeführt. Als Qualitätskontrollmaßnahme wird die Leistung des Forschungspersonals Kopf-Kopf mit klinischen Testdiensten an jedem Standort verglichen. In jeder Testeinstellung erhalten die Ermittler Ergebnisse in doppelter Ausführung sowohl für die Kollagen/Epinephrin- als auch für die Kollagen/ADP-Patronen. Die Ermittler werden auch die Blutplättchen-TXB2-, 20-HETE- und AA-Konzentrationen mittels LC-MS/MS messen. Darüber hinaus werden die Forscher eine Methode entwickeln und anwenden, um das kovalente Aspirin-Addukt von COX-1 in isolierten Blutplättchen von Studienteilnehmern zu quantifizieren.

Statistische Methoden: Für jede Studienpopulation und Untergruppen mit extremen Erythrozyten-n-3-PUFA-Phänotypen werden die Forscher lineare Regressionsmodelle mit robusten Standardfehlern verwenden, um signifikante Unterschiede in den mittleren absoluten Thrombozytenaggregationstestergebnissen unter basalen und Aspirin-behandelten Bedingungen zu identifizieren ( primärer Endpunkt) sowie die Veränderung der Thrombozytenaggregation nach der Behandlung bis zum Ausgangswert. Der Heterogenität zwischen Paaren extremer Phänotyp-Untergruppen wird Rechnung getragen, indem Geschlecht, Alter, BMI und Thrombozytenzahl als Kovariaten in das Regressionsmodell aufgenommen werden. Die Berechnung der Stichprobengröße für jeden Leistungsstandort (n = 25 pro n-3 PUFA-Untergruppe) basierte auf einer Aussagekraft von mindestens 0,8 zum Nachweis eines Unterschieds in der mittleren Thrombozytenaggregation zwischen den beiden Extremen (0–10 und 90–100 Perzentile) n -3 PUFA-Untergruppen unter basalen Bedingungen bei einem Signifikanzniveau von 0,05. Als sekundäre Analyseebene vergleichen die Forscher für jede Untergruppe der extremen RBC n-3 PUFA-Phänotypen auch die mittleren Thrombozyten-TXB2- und 20-HETE-Konzentrationen unter basalen und Aspirin-behandelten Bedingungen sowie nach der Behandlung -Basisänderung. Schließlich umfasst eine dritte Analyseebene das Testen jeder Studienpopulation auf einen Unterschied im Ausmaß des Aspirin-Addukts an COX-1 zwischen Gruppen mit extremen RBC n-3-PUFA-Phänotypen. Die Forscher werden für jede Studienpopulation separat und insgesamt auf Assoziationen zwischen den Ergebnissen der Thrombozytenaggregationstests und biochemischen Messungen der Thrombozytenaktivierung testen.

Die Prüfärzte werden lineare Regressionsmodelle verwenden, um einen Zusammenhang zwischen häufigen CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- und ACTN1-Genotypen und den mittleren absoluten Thrombozytenaggregationstestergebnissen unter basalen und mit Aspirin behandelten Bedingungen sowie nach der Behandlung zu testen. Grundlinienveränderung der Thrombozytenaggregation. In einer explorativen Analyse werden die Forscher Linear Mixed Effects (LME)-Modelle auf den kombinierten Vor- und Nachbehandlungsdatensatz anwenden, um Assoziationen mit n-3 PUFAs-Gruppen und Arzneimittelwirkungen zu testen sowie etwaige Modifikationen dieser Wirkungen zu identifizieren durch CYP4A11-, CYP4F2-, CYP4F11-, PEAR1- und ACTN1-Variation, indem signifikante Interaktionseffekte in die Modelle aufgenommen und getestet wurden. Die Forscher werden zufällige Effekte in die LME aufnehmen, um die potenzielle Heterogenität in jeder der Populationen zu berücksichtigen.