Preditores genéticos e dietéticos da resposta antiplaquetária

Objetivo: Neste objetivo, os investigadores testarão a hipótese de que os n-3 PUFAs modificam a resposta antiplaquetária à aspirina, medindo e comparando três indicadores diferentes de resposta à aspirina em indivíduos com níveis extremamente altos e baixos de n-3 PUFA nas hemácias, sob uma estado basal e após 1 semana de tratamento com aspirina uma vez ao dia. Os três indicadores são: 1) concentrações plaquetárias de TXB2 e 20-HETE; 2) agregação plaquetária ex vivo (em resposta a estímulos externos); e 3) aduto covalente de aspirina de COX-1. Os investigadores também testarão se variantes comuns nos genes CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 estão ou não associadas a alterações basais e induzidas pela aspirina na agregação plaquetária e, em uma análise exploratória, modificarão os efeitos dos n-3 PUFAs na resposta à aspirina.

Procedimentos e População: Investigadores da University of Montana, Southcentral Foundation e Oregon Health & Science University recrutarão um total de 150 indivíduos (50 em cada local) para participar do estudo. Em cada local de atuação, os participantes recrutados representarão 25 indivíduos com altas e 25 indivíduos com baixas concentrações de PUFA n-3 em RBC. Depois de fornecer o consentimento por escrito, cada participante do estudo será examinado quanto ao histórico médico e testes de laboratório clínico para garantir uma boa saúde e bons parâmetros de exames de sangue, rins e fígado. Se considerado elegível, cada participante fornecerá amostras de sangue em jejum de 12 horas (durante a noite) para isolamento de plasma, plaquetas, linfócitos e glóbulos vermelhos. Uma amostra de sangue separada será coletada em um tubo tratado com citrato para teste de agregação plaquetária usando a plataforma PFA-100. As frações de sangue isoladas serão armazenadas a -80°C.

Após a amostragem da linha de base, cada participante receberá seis doses de aspirina (80 mg/dia por 2 dias) e será instruído a tomar uma dose diariamente aproximadamente às 9h. No dia seguinte à última dose de aspirina, o participante fornecerá amostras de sangue para testes repetidos de agregação plaquetária, análise de lipídios plaquetários e medição do aduto covalente da aspirina para COX-1 e uma amostra de urina para confirmar o consumo de aspirina por meio do teste de salicilato. Durante 24 horas antes do teste de agregação plaquetária, os participantes do estudo serão solicitados a evitar alimentos que possam levar a resultados de teste espúrios (por exemplo, chocolate, chá, café, cola, vinho tinto, cerveja, tomate, uva, suco de uva, laranja e cranberry sumos, bem como alimentos silvestres tradicionais que incluem bagas, raízes de plantas, verduras, etc.).

Métodos analíticos: Testes de sangue total, ponto de atendimento e agregação plaquetária serão realizados usando o instrumento automatizado PFA-100. O desempenho do pessoal de pesquisa será comparado diretamente aos serviços de testes clínicos em cada local, como uma medida de controle de qualidade. Em cada configuração de teste, os investigadores obterão resultados em duplicata para cartuchos de colágeno/epinefrina e colágeno/ADP. Os investigadores também medirão as concentrações plaquetárias de TXB2, 20-HETE e AA, por LC-MS/MS. Além disso, os pesquisadores desenvolverão e empregarão um método para quantificar o aduto covalente de COX-1 da aspirina em plaquetas isoladas dos participantes do estudo.

Métodos estatísticos: Para cada população de estudo e subgrupos com fenótipos RBC n-3 PUFA extremos, os investigadores usarão modelos de regressão linear com erros padrão robustos para identificar diferenças significativas nos resultados médios absolutos do teste de agregação plaquetária sob condições basais e tratadas com aspirina ( resultado primário), bem como a mudança pós-tratamento para a linha de base na agregação plaquetária. A heterogeneidade entre pares de subgrupos de fenótipos extremos será contabilizada incluindo sexo, idade, IMC e contagem de plaquetas como covariáveis ​​no modelo de regressão. O cálculo do tamanho da amostra para cada local de desempenho (n = 25 por n-3 subgrupo de PUFA) foi baseado em ter poder de pelo menos 0,8 para detectar uma diferença na agregação plaquetária média entre os dois extremos (0-10 e 90-100 percentis) n -3 subgrupos de PUFA em condições basais, a um nível de significância de 0,05. Como um nível secundário de análise, para cada subgrupo dos fenótipos RBC n-3 PUFA extremos, os investigadores também compararão as concentrações médias de plaquetas TXB2 e 20-HETE sob condições basais e tratadas com aspirina, bem como o pós-tratamento para -alteração da linha de base. Finalmente, um terceiro nível de análise envolverá testar cada população de estudo para uma diferença na extensão do aduto de aspirina para COX-1 entre grupos com fenótipos RBC n-3 PUFA extremos. Os investigadores testarão as associações entre os resultados do teste de agregação plaquetária e as medidas bioquímicas da ativação plaquetária, cada população de estudo separadamente e em conjunto.

Os investigadores usarão modelos de regressão linear para testar uma associação entre os genótipos CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 comuns e os resultados médios absolutos do teste de agregação plaquetária em condições basais e tratadas com aspirina, bem como os resultados pós-tratamento para alteração basal na agregação plaquetária. Em uma análise exploratória, os investigadores aplicarão modelos Linear Mixed Effects (LME) ao conjunto de dados pré e pós-tratamento combinados para testar associações com o grupo n-3 PUFAs e efeitos de drogas, bem como para identificar quaisquer modificações desses efeitos pela variação de CYP4A11, CYP4F2, CYP4F11, PEAR1 e ACTN1 incluindo e testando efeitos de interação significativos nos modelos. Os investigadores incluirão efeitos aleatórios no LME para explicar a potencial heterogeneidade em cada uma das populações.