Adipocytokiner vid endometriecancer

1. BAKGRUND

   Endometriecancer är den vanligaste maligniteten i det kvinnliga könsorganet. Det är den fjärde vanligaste cancersjukdomen i Storbritannien med cirka 9 500 nya fall 2017, nuvarande livstidsrisk är 1 av 36 kvinnor. Antalet kvinnor som får diagnosen endometriecancer fortsätter att öka varje år. Sedan början av 1990-talet har incidensen av livmodercancer ökat med nästan tre femtedelar (55 %) i Storbritannien (2015-2017). Sambandet mellan endometriecancer och fetma är väldokumenterat. 7,5 % av alla cancerfall hos kvinnor i Storbritannien beror på övervikt/fetma (BMI ≥25 kg/m2). För endometriecancer stiger denna risk till 34%. En genomgång av metaanalyser visade att risken för endometriecancer är 16 % högre per 5 kg som tagits upp under vuxen ålder, 29 % högre per 10 cm ökning av höftomkretsen och 27 % högre per 10 cm ökning av midjeomkretsen. Denna högre risk för endometriecancer med förhöjt BMI finns hos både pre- och postmenopausala kvinnor. Dessutom tenderar patienter som är överviktiga att få ett sämre resultat med fler samsjukligheter än deras icke-överviktiga motsvarigheter.

   I tillståndet övervikt och fetma försämras fettvävnadens funktion vilket resulterar i ett tillstånd av kronisk inflammation. I detta inflammatoriska tillstånd utsöndrar adipocyter och makrofager flera molekyler, adipokiner och inflammatoriska cytokiner, vilket kan främja tumörutveckling och angiogenes och stimulera adhesioner och migration av celler.

   De flesta inblandade adipocytokiner i tumörbildningsvägen är adiponektin, leptin, tumörnekrosfaktor-α (TNF-α), Interleukin-6 (IL-6) och insulinliknande tillväxtfaktor 1 och 2 (IGF 1 och 2).

   Adipocytokinrelaterade signalvägar är viktiga för utvecklingen av en inflammatorisk mikromiljö för tumörer. Denna process tros öka risken för endometriecancer genom att inducera cellproliferation och förhindra cellapoptos. Adiponectin, det mest förekommande adipokinet, har föreslagits ha anti-angiogena, antiinflammatoriska och anti-apoptotiska egenskaper. Förhöjda leptinnivåer i överviktiga tillstånd främjar inflammation genom att stimulera produktionen av IL-6, TNFa såväl som IL-1 och IL-126. Leptin- och adiponektinutsöndring motregleras in vivo. En studie av Luhn et. al. har visat att adiponektin har ett omvänt samband med risken för endometriecancer och leptin har en direkt korrelation.

   I en inflammatorisk miljö utsöndrar makrofager också potenta proinflammatoriska cytokiner såsom TNF-a och IL-6, vilka är kända för att aktivera många transkriptionsfaktorer som reglerar uttrycket av gener involverade i immunsvar, anti-apoptos, angiogenes och metastaser. Mekanismerna för tumörbildning tros vara inblandade är produktion av fria radikaler som orsakar DNA-skador och försämrad DNA-reparation.

   Forskning har vidare föreslagit att systemiska nivåer av insulinliknande tillväxtfaktor (IGF) är oreglerade vid fetma antingen på grund av ökad IGF-produktion eller genom nedreglering av produktionen av IGF-bindande protein (IGFBP). IGF 1 är en tillväxt- och proliferationspromotor och har hämmande effekter på celldöd och är en stor bidragande faktor i många neoplastiska transformationer.

   Ovanstående biomarkörer är fysiologiskt relaterade till varandra och kommer sannolikt att spegla ett mer begränsat antal underliggande biologiska vägar. Möjligen arbetar de i en synergistisk kapacitet för att modulera risken att utveckla endometriecancer. Om specifika mönster av cytokinuttryck visade sig vara förutsägande för negativa resultat, kan de specifika receptorerna riktas mot som ett terapeutiskt alternativ för endometriecancer11. Ingen studie har hittills tittat på alla dessa markörer tillsammans i serum- och vävnadsprover från samma endometriecancerpatienter för att ge en mer hälsosam uppfattning om deras effekt på tumöruppkomst, progression och resultat. Därför är denna studie utformad för att bedöma den prognostiska betydelsen av dessa sex biomarkörer i blodet och vävnaden hos endometriecancerpatienter och samrelatera nivåerna med deras BMI och tumörtyp, efter justering för ålder, paritet, rökstatus, menopausal status, användning av hormonersättningsterapi (HRT)/hormonell preventivmedel, och prevalensen av diabetes och högt blodtryck.

2. LOGISK GRUND

   Utveckling av nya biomarkörer för en mängd olika användningsområden inklusive diagnos, behandlingsövervakning och prognostisering står på Cancer Reform Strategy-agendan och uppmuntras aktivt av National Cancer Research Institute och Medical Research Council.

   Att förstå hur adipocytokiner påverkar risken för endometriecancer kan hjälpa till att belysa biologiska mekanismer som är viktiga för den observerade fetma-endometriecancerföreningen.

3. TEORITISK RAM

   Eftersom incidensen av endometriecancer fortsätter att öka finns det ett hälsobehov av ett bättre diagnostiskt och prognostiskt tillvägagångssätt.

   Att studera de olika biomarkörnivåerna i blod och cancervävnad kommer att göra det möjligt för oss att leta efter nya mål som kan vara användbara vid behandling och prognostisering av denna cancer.

   Om nivåerna av dessa markörer ändras markant efter behandling kan utredarna också undersöka om det kommer att vara möjligt att använda dessa markörer för att bedöma respons på behandlingen eftersom uppföljning av risk för återfall utgör en viktig del av behandlingsprotokollet.

4. FORSKNINGSFRÅGOR/MÅL:

   Att bedöma sambandet mellan endometriecancer och blod- och vävnadsbiomarkörer hos patienter som remitterats för endometriecancerhantering till Royal Surrey NHS Foundation trust och att korrelera med fetma och tumöregenskaper.

5. STUDIEDESIGN och METODER FÖR DATAINSAMLING OCH DATAANALYS

   5.1. Studera design

   Alla patienter som remitteras till Royal Surrey NHS Foundation trust med diagnostiserad livmodercancer kommer att få forskningsinformationsbroschyren.

   Inledningsvis kommer ett inbjudningsbrev att skickas tillsammans med patienternas mötesbrev för att informera dem om studien och ge dem tid för preliminär övervägande av studien.

   Patienterna kommer sedan att kontaktas på poliklinikernas mottagningar efter den första konsultationen av läkaren. De kommer att få en informationsbroschyr för deltagarna som beskriver studiens logik, metodik och analys. Patienter som samtycker till att delta i studien kommer att uppmanas att underteckna ett samtyckesformulär efter förklaring.

   Demografisk data kommer att samlas in samtidigt för att korrelera olika riskfaktorer förknippade med utvecklingen av livmodercancer. Denna data kommer att samlas in av:

   • En kort patientintervju (10 minuter)
   • Patienternas medicinska anteckningar Data från intervjun kommer att matas in direkt i en befintlig avdelningsdatabas för gynekologisk onkologi som är lösenordsskyddad och lagras på NHS-datorer. En kopia av dataproformen från intervjun kommer att arkiveras i ett säkert rum inom universitetsavdelningen för att möjliggöra verifiering av källdata.

   Deltagarna får sedan ta 30 ml (2 ½ matskedar) venöst blod på operationsdagen.

   Vävnadsprover från deltagarna som genomgår hysterektomi kommer att samlas in enligt följande: PI kommer att samla in all färsk vävnad (fettvävnad) direkt från teatern före fixering eftersom den inte behövs för att fastställa diagnos och livmodercancervävnaden och lymfkörteln kommer att samlas in av PI efter histopatologisk undersökning från histopatologisk avdelning efter att diagnos ställts. All vävnadsbearbetning kommer att följa Human Tissue Authority (HTA) riktlinjer och kommer att utföras på onkologilaboratoriet i Leggett-byggnaden vid University of Surrey.

   Deltagarna kommer att ha ett upprepat blodprov (30 ml) på dag 1 efter operationen och vid deras 3 eller 6 månaders rutinmässiga uppföljningstid efter operationen.

   För de deltagare som rekommenderas kemoterapi kommer utredarna också att be om samtycke till att samla in demografiska data vid tidpunkten för konsultationen och baslinjeblodprov (30 ml venöst blod) innan kemoterapi påbörjas och efter 3:e och 6:e kemoterapicyklerna för att bedöma eventuella förändringar i biomarkörerna som kan korrelera med progression eller regression av sjukdomen.

   Utredarna kommer också att erhålla arkivvävnadsblock (av livmodercancerpatienter som godkänts från en tidigare studie för användning under en lämplig etikkommitté godkänd forskning) för att hjälpa till att öka antalet rekryteringar till denna studie. Deras demografiska data med identifieringslogg kommer att göras tillgängliga för PI endast för att bedöma för korrelation mellan deras data och vävnadsdiagnosen under analys.

   5.2. Provanalys

   ELISA kommer att användas för att analysera biomarkörnivåer i blodprover.

   För vävnadsanalys kommer utredarna att sätta upp en vävnadsmikroarray (TMA). Detta kommer att möjliggöra en mer enhetlig färgning av provet för immunhistokemi utan variation mellan proverna av färgningsmetoden. Varje fall kommer att granskas och intresseområdet (tumören) kommer att markeras på bilden och kärnor från de intressanta områdena kommer att användas för att skapa mikroarrayblocket. Sektioner kan sedan skäras från mikroarrayblocket och objektglas förberedas för immunfärgning. Fördelen med att använda denna metod är att proverna utsätts för samma förhållanden samtidigt som de färgas och samma del av en tumör kan färgas tillförlitligt för flera markörer. Vävnadssektioner från TMA kommer att användas för immunfärgning och uttrycket av markörerna av intresse kommer att bedömas. Kliniska data som är tillgängliga om fallen kommer sedan att korreleras med de histologiska och immunhistokemiska poängen och statistisk analys kommer att utföras.

   5.3. Dataanalys

   Standard statistiska analytiska verktyg kommer att användas för att analysera data. Relation mellan olika variabler kommer att sökas med oddskvot, konfidensintervall och signifikans med P-värde (

6. PROV OCH REKRYTERING

Potentiella deltagare kommer att identifieras i Royal Surrey NHS Foundation trust - antingen ses här eller hänvisas till här och får hennes behandling här för diagnostiserad endometriecancer.

6.1. Provstorlek

Utredarna kommer att sträva efter att rekrytera 30-60 patienter med diagnosen endometriecancer i studien. Denna provstorlek kommer också att inkludera arkiverat vävnadsprov (tidigare godkänt och lagrat i Leggett-byggnaden, University of Surrey, för användning i framtida etisk forskning).

6.2. Rekrytering

Alla patienter som ses eller remitteras med endometriecancer vid Royal Surrey Oncology Department kommer att bjudas in att delta i studien.

Patienterna kommer inte att få några betalningar för deltagande i studien. Utredarna strävar efter att få all information och prover vid rutinbesöken.

6.2.1. Providentifiering

Patienter som diagnostiserats med endometriecancer kommer att identifieras genom mötet med det multidisciplinära teamet för gynekologisk onkologi eller av teamen för gynekologisk onkologi eller medicinsk onkologi.

6.2.2. Samtycke

Skriftligt samtycke erhålls efter att patienten har fått deltagarinformationen och haft möjlighet att diskutera och ställa frågor om studien. Tillräckligt med tid kommer att ges för ändamålet. Patienter måste alla ha förmåga att samtycka. Samtycke kommer att ges av kliniker i teamet för gynekologisk onkologi. Vid behov kan en översättare eller språklinje användas.

Samtycke kommer också att tas för användning av prover (anonymiserade och lagrade i Leggett-byggnaden, University of Surrey enligt alla regler från HTA) för användning i framtida forskning.