Adipocitocinas no câncer de endométrio

1. FUNDO

   O câncer de endométrio é a neoplasia maligna mais comum do trato genital feminino. É o quarto tipo de câncer mais comum no Reino Unido, com cerca de 9.500 novos casos em 2017, sendo o risco de vida atual de 1 em 36 mulheres. O número de mulheres diagnosticadas com câncer de endométrio continua a aumentar a cada ano. Desde o início da década de 1990, as taxas de incidência de câncer uterino aumentaram quase três quintos (55%) no Reino Unido (2015-2017). A associação entre câncer de endométrio e obesidade está bem documentada. 7,5% de todos os cânceres em mulheres no Reino Unido são atribuíveis ao excesso de peso/obesidade (IMC ≥25 kg/m2). Para câncer de endométrio, esse risco sobe para 34%. Uma revisão de meta-análises mostrou que o risco de câncer de endométrio é 16% maior por 5 kg ganhos durante a idade adulta, 29% maior por 10 cm de aumento na circunferência do quadril e 27% maior por 10 cm de aumento na circunferência da cintura. Esse maior risco de câncer de endométrio com IMC elevado está presente tanto em mulheres na pré quanto na pós-menopausa. Além disso, os pacientes obesos tendem a ter um resultado pior com mais comorbidades do que os não obesos.

   No estado de sobrepeso e obesidade, a função do tecido adiposo se deteriora resultando em um estado de inflamação crônica. Nesse estado inflamatório, adipócitos e macrófagos secretam diversas moléculas, adipocinas e citocinas inflamatórias, que podem promover o desenvolvimento tumoral e a angiogênese e estimular aderências e migração de células.

   As adipocitocinas mais implicadas na via de tumorigênese são adiponectina, leptina, fator de necrose tumoral-α (TNF-α), interleucina-6 (IL-6) e fator de crescimento semelhante à insulina 1 e 2 (IGF 1 e 2).

   As vias de sinalização relacionadas à adipocitocina são importantes no desenvolvimento de um microambiente inflamatório para tumores. Acredita-se que esse processo aumente o risco de câncer de endométrio, induzindo a proliferação celular e prevenindo a apoptose celular. Sugere-se que a adiponectina, a adipocina mais abundante, tenha propriedades antiangiogênicas, antiinflamatórias e antiapoptóticas. Os níveis elevados de leptina no estado obeso promovem a inflamação estimulando a produção de IL-6, TNFα, bem como IL-1 e IL-126. A secreção de leptina e adiponectina é contra-regulada in vivo. Um estudo de Luhn et. al. demonstrou que a adiponectina tem uma relação inversa com o risco de câncer de endométrio e a leptina tem uma correlação direta.

   Além disso, em um ambiente inflamatório, os macrófagos secretam potentes citocinas pró-inflamatórias, como TNF-α e IL-6, que são conhecidas por ativar vários fatores de transcrição que regulam a expressão de genes envolvidos em respostas imunes, anti-apoptose, angiogênese e metástase. Acredita-se que os mecanismos da tumorigênese estejam envolvidos na produção de radicais livres que causam danos ao DNA e prejudicam o reparo do DNA.

   Pesquisas sugeriram ainda que os níveis sistêmicos do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF) são desregulados na obesidade devido ao aumento da produção de IGF ou pela regulação negativa da produção da proteína de ligação do IGF (IGFBP). O IGF 1 é um promotor de crescimento e proliferação e tem efeitos inibitórios na morte celular e é um dos principais contribuintes em muitas transformações neoplásicas.

   Os biomarcadores acima estão inter-relacionados fisiologicamente e provavelmente refletem um número mais restrito de vias biológicas subjacentes. Possivelmente, eles trabalham em uma capacidade sinérgica para modular o risco de desenvolver câncer de endométrio. Se padrões específicos de expressão de citocinas forem preditivos de resultado adverso, então os receptores específicos podem ser direcionados como uma opção terapêutica para o câncer endometrial11. Nenhum estudo até agora analisou todos esses marcadores juntos nas amostras de soro e tecido dos mesmos pacientes com câncer de endométrio para dar uma ideia mais completa sobre seu efeito na gênese, progressão e resultado do tumor. Portanto, este estudo foi projetado para avaliar a significância prognóstica desses seis biomarcadores no sangue e tecido de pacientes com câncer de endométrio e correlacionar os níveis com seu IMC e tipo de tumor, após ajuste para idade, paridade, tabagismo, estado de menopausa, uso de terapia de reposição hormonal (TRH)/contracepção hormonal e prevalência de diabetes e hipertensão.

2. FUNDAMENTAÇÃO

   O desenvolvimento de novos biomarcadores para uma variedade de usos, incluindo diagnóstico, monitoramento de tratamento e prognóstico, está na agenda da Estratégia de Reforma do Câncer e é ativamente incentivado pelo Instituto Nacional de Pesquisa do Câncer e pelo Conselho de Pesquisa Médica.

   Compreender como as adipocitocinas influenciam o risco de câncer de endométrio pode ajudar a elucidar mecanismos biológicos importantes para a associação observada entre obesidade e câncer de endométrio.

3. REFERENCIAL TEÓRICO

   Como a incidência de câncer de endométrio continua a aumentar, há uma necessidade de saúde para uma melhor abordagem diagnóstica e prognóstica.

   Estudar os diferentes níveis de biomarcadores no sangue e no tecido cancerígeno permitirá procurar novos alvos que possam ser úteis no tratamento e prognóstico deste tipo de cancro.

   Além disso, se os níveis desses marcadores mudarem significativamente após o tratamento, os investigadores podem investigar se será possível usar esses marcadores para avaliar a resposta ao tratamento, pois o acompanhamento do risco de recorrência constitui uma parte importante do protocolo de tratamento.

4. QUESTÕES DE PESQUISA / OBJETIVOS:

   Avaliar a relação entre o câncer de endométrio e os biomarcadores de sangue e tecido em pacientes encaminhadas para o tratamento do câncer de endométrio à Royal Surrey NHS Foundation trust e correlacionar com a obesidade e as características do tumor.

5. DESENHO DE ESTUDO e MÉTODOS DE COLETA DE DADOS E ANÁLISE DE DADOS

   5.1. Design de estudo

   Todos os pacientes encaminhados para o Royal Surrey NHS Foundation trust com diagnóstico de câncer uterino receberão o folheto informativo da pesquisa.

   Inicialmente, uma carta-convite será enviada juntamente com a carta de consulta clínica dos pacientes para informá-los sobre o estudo e dar-lhes tempo para consideração preliminar do estudo.

   Os pacientes serão então abordados nos ambulatórios após a consulta inicial pelo clínico. Eles receberão um folheto informativo do participante detalhando a lógica, a metodologia e a análise do estudo. Os pacientes que concordarem em participar do estudo serão solicitados a assinar um termo de consentimento após explicação.

   Dados demográficos serão coletados ao mesmo tempo para correlacionar vários fatores de risco associados ao desenvolvimento de câncer uterino. Esses dados serão coletados por:

   • Uma breve entrevista com o paciente (10 minutos)
   • Anotações médicas dos pacientes Os dados da entrevista serão inseridos diretamente em um banco de dados departamental existente para oncologia ginecológica, protegido por senha e armazenado nos computadores do NHS. Uma cópia dos proformas de dados da entrevista será arquivada em uma sala segura dentro do departamento da Universidade para permitir a verificação dos dados de origem.

   Os participantes receberão 30mls (2 ½ colheres de sopa) de sangue venoso no dia da cirurgia.

   Amostras de tecido das participantes submetidas à histerectomia serão coletadas da seguinte forma: o PI coletará qualquer tecido fresco (tecido adiposo) diretamente do centro cirúrgico antes da fixação, pois não é necessário para estabelecer o diagnóstico e o tecido do câncer uterino e o linfonodo serão coletados pelo PI após exame histopatológico do departamento de histopatologia após o diagnóstico ser estabelecido. Todo o processamento de tecidos seguirá as diretrizes da Human Tissue Authority (HTA) e será realizado no laboratório de Oncologia no edifício Leggett da Universidade de Surrey.

   Os participantes terão um exame de sangue repetido (30mls) no dia 1 pós-operatório e em sua consulta de acompanhamento pós-operatório de rotina de 3 ou 6 meses.

   Para os participantes que recebem quimioterapia recomendada, os investigadores também pedirão consentimento para coletar dados demográficos no momento da consulta e amostra de sangue basal (30mls de sangue venoso) antes de iniciar a quimioterapia e após o 3º e 6º ciclos de quimioterapia para avaliar quaisquer alterações nos biomarcadores que pode estar correlacionada com a progressão ou regressão da doença.

   Os investigadores também obterão blocos de tecido de arquivo (de pacientes com câncer uterino consentidos em um estudo anterior para uso durante uma pesquisa apropriada aprovada pelo comitê de ética) para ajudar a aumentar o número de recrutamentos para este estudo. Seus dados demográficos com registro de identificação serão disponibilizados ao PI apenas para avaliar a correlação entre seus dados e o diagnóstico do tecido durante a análise.

   5.2. Análise de amostra

   O ELISA será usado para testar os níveis de biomarcadores em amostras de sangue.

   Para análise de tecido, os investigadores irão configurar um microarranjo de tecido (TMA). Isso permitirá uma coloração mais uniforme da amostra para imuno-histoquímica sem variação entre amostras do método de coloração. Cada caso será revisto e a área de interesse (tumor) será marcada na lâmina e os núcleos das áreas de interesse serão usados ​​para criar o bloco de microarray. As seções podem então ser cortadas do bloco de microarray e as lâminas preparadas para coloração imunológica. A vantagem de usar este método é que as amostras são submetidas às mesmas condições durante a coloração e a mesma parte de um tumor pode ser corada de forma confiável para vários marcadores. Seções de tecido do TMA serão usadas para imunomarcação e a expressão dos marcadores de interesse será pontuada. Os dados clínicos disponíveis dos casos serão então correlacionados com os escores histológicos e imuno-histoquímicos e será realizada análise estatística.

   5.3. Análise de dados

   Ferramentas analíticas estatísticas padrão serão usadas para analisar os dados. A relação entre diferentes variáveis ​​será buscada com odds ratio, intervalo de confiança e significância com valor P (

6. AMOSTRA E RECRUTAMENTO

Os participantes em potencial serão identificados no fundo Royal Surrey NHS Foundation - vistos aqui ou encaminhados aqui e recebendo seu tratamento aqui para câncer de endométrio diagnosticado.

6.1. Tamanho da amostra

Os investigadores terão como objetivo recrutar 30-60 pacientes com diagnóstico de câncer de endométrio no estudo. Este tamanho de amostra também incluirá amostra de tecido arquivada (anteriormente consentida e armazenada no edifício Leggett, Universidade de Surrey, para uso em futuras pesquisas éticas).

6.2. Recrutamento

Todas as pacientes atendidas ou encaminhadas com câncer de endométrio no Royal Surrey Oncology Department serão convidadas a participar do estudo.

Os pacientes não receberão nenhum pagamento pela participação no estudo. Os investigadores visam obter todas as informações e amostras no momento das visitas de rotina.

6.2.1. Identificação da amostra

As pacientes diagnosticadas com câncer de endométrio serão identificadas através da reunião da Equipe Multidisciplinar de Oncologia Ginecológica ou pelas equipes de Oncologia Ginecológica ou Oncologia Médica.

6.2.2. Consentimento

O consentimento por escrito será obtido depois que o paciente receber o folheto informativo do participante e tiver a oportunidade de discutir e fazer perguntas sobre o estudo. Tempo suficiente será dado para o efeito. Todos os pacientes devem ter capacidade para consentir. O consentimento será obtido pelos médicos da equipe de oncologia ginecológica. Se necessário, um tradutor ou linha de idiomas pode ser usado.

O consentimento também será obtido para o uso de amostras (anônimas e armazenadas no edifício Leggett, Universidade de Surrey, seguindo todos os regulamentos da HTA) para uso em pesquisas futuras.