Amniokorioniska membranceller i moderns blod som en biomarkör för för tidig födsel

Syfte:

Syftet med studien är 1) att karakterisera cirkulerande fosteramniokorionmembranceller (ACM-celler) hos gravida kvinnor och 2) att undersöka om de kan fungera som biomarkörer för amniokorionmembrandysfunktion, inklusive risk för för tidig födsel.

Bakgrund:

Globalt sett har för tidig födsel (15 milj. per år) är den vanligaste orsaken till barndödlighet under 5 år (1 milj. per år) och sjuklighet. Viktiga vägar inkluderar prematura förlossningssammandragningar (PLC), Preterm Prelabor Rupture of the Fetal Membranes (PPROM) och iatrogen förlossning på grund av preeklampsi och fostertillväxtbegränsning.

Vid förlossningen genomgår fostrets amniokorioniska membran en cellulär åldrande och släpper ut fostrets amniokorioniska membranceller (ACM-celler) till moderns cirkulation. Liknande funktioner förväntas ses i fall med PPROM. I samarbete med ARCEDI Biotech Aps och University of Texas Medical Branch i Galveston har Aarhus Universitet identifierat specifika fetala membrancellmarkörer, dvs specifika proteiner som uttrycks i hög grad av ACM-cellerna. Kommersiellt tillgängliga antikroppar specifika för dessa identifierade proteiner kan användas för att isolera ACM-celler från moderns blod. De preliminära studierna indikerar att cirkulerande ACM-celler finns under andra hälften av graviditeten men inte under den första hälften av graviditeten.

Utredarna vill bekräfta med immunhistokemi att specifika antikroppar kan identifiera ACM-celler i fostrets membran, och att de kan vara en plattform för att isolera ACM-celler från moderns cirkulation.

Material och metoder:

Utredarna kommer att isolera ACM-celler från moderns blod genom Magnetic Activating Cell Sorting (MACS) med hjälp av olika specifika antikroppar för ACM-celler. De anrikade ACM-cellerna kommer att färgas med fluorescensmärkta cytokeratin- och vimentinantikroppar och sorteras individuellt med fluorescensaktiverad cellsortering (FACS). Den sanna identifieringen av de fetala ACM-cellerna kommer att göras genom Short Tandem Repeat (SRT) analys.

De antikroppar som presterar bäst kommer att väljas ut utifrån pilotstudier på gravida kvinnor vid termin och i graviditetsvecka 12, 20, 28 och 34, samt vid förlossningen och efter förlossningen. Proteinuttrycket och specificiteten för varje antikropp kommer att bekräftas genom immunhistokemi och ljusfältsmikroskopi på biopsier från fostermembranen, placentavävnaden och placentabädden i livmodern.

Det etablerade protokollet kommer att användas för att utvärdera antalet ACM-celler i moderns blod under normala och patologiska graviditeter på tvärsnittskohorter av fullgångna gravida kvinnor med och utan förlossningssammandragningar och spontana membranbrott, kvinnor med PLC före 34 veckors graviditet, kvinnor med PPROM före 34 veckors graviditet, och en kontrollgrupp vid graviditetsåldern 25+0 till 37.

Perspektiv:

I framtiden förväntas resultaten förbättra diagnostik och behandling av hotande för tidig födsel, och på så sätt förhindra dödlighet och sjuklighet hos miljontals barn över hela världen.