Клетки амниохориальной мембраны в крови матери как биомаркер преждевременных родов

Цель:

Цель исследования: 1) охарактеризовать циркулирующие клетки амниохориальной мембраны плода (клетки ACM) у беременных женщин и 2) выяснить, могут ли они функционировать в качестве биомаркеров дисфункции амниохориальной мембраны, включая риск преждевременных родов.

Фон:

Во всем мире преждевременные роды (15 млн. в год) является ведущей причиной детской смертности в возрасте до 5 лет (1 млн. в год) и заболеваемость. Важные пути включают преждевременные родовые схватки (PLC), преждевременный разрыв плодных оболочек перед родами (PPROM) и ятрогенные роды из-за преэклампсии и ограничения роста плода.

Во время родов амниохориальная мембрана плода подвергается клеточному старению и сбрасывает клетки амниохориальной мембраны плода (клетки ACM) в кровоток матери. Ожидается, что аналогичные функции будут наблюдаться в случаях с PPROM. В сотрудничестве с ARCEDI Biotech Aps и Медицинским отделением Техасского университета в Галвестоне Орхусский университет идентифицировал специфические клеточные маркеры фетальной мембраны, то есть специфические белки, высоко экспрессируемые клетками ACM. Имеющиеся в продаже антитела, специфичные к этим идентифицированным белкам, можно использовать для выделения клеток ACM из материнской крови. Предварительные исследования показывают, что циркулирующие клетки ACM присутствуют во второй половине беременности, но не в первой половине беременности.

Исследователи хотят подтвердить с помощью иммуногистохимии, что специфические антитела могут идентифицировать клетки ACM в оболочках плода и что они могут быть платформой для выделения клеток ACM из кровотока матери.

Материалы и методы:

Исследователи будут выделять клетки ACM из материнской крови с помощью магнитно-активирующей сортировки клеток (MACS) с использованием различных специфических антител для клеток ACM. Обогащенные клетки ACM будут окрашены с использованием антител к цитокератину и виментину, меченных флуоресцентной меткой, и отсортированы по отдельности с помощью сортировки клеток, активируемых флуоресценцией (FACS). Истинная идентификация клеток ACM, полученных из плода, будет проводиться с помощью анализа коротких тандемных повторов (SRT).

Антитела с наилучшей эффективностью будут выбраны на основе пилотных исследований беременных женщин в срок и на 12, 20, 28 и 34 неделе беременности, а также в родах и послеродовом периоде. Экспрессия белка и специфичность каждого антитела будут подтверждены с помощью иммуногистохимии и светлопольной микроскопии биоптатов плодных оболочек, плацентарной ткани и плацентарного ложа в матке.

Установленный протокол будет использован для оценки количества клеток АКМ в материнской крови при нормальной и патологической беременности на поперечных когортах доношенных беременных с и без схваток и спонтанного разрыва плодных оболочек, женщин с ПЛС до 34 недель беременности, женщин с PPROM до 34 недель беременности и контрольная группа в гестационном возрасте от 25+0 до 37.

Перспективы:

Ожидается, что в будущем результаты улучшат диагностику и лечение угрожающих преждевременных родов, тем самым предотвратив смертность и заболеваемость миллионов детей во всем мире.