Amniochorionische membraancellen in het maternale bloed als biomarker voor vroeggeboorte

Doel:

Het doel van de studie is 1) om circulerende foetale amniochorionische membraancellen (ACM-cellen) bij zwangere vrouwen te karakteriseren en 2) om te onderzoeken of ze kunnen functioneren als biomarkers van amniochorionische membraandisfunctie, inclusief het risico op vroeggeboorte.

Achtergrond:

Wereldwijd is vroeggeboorte (15 miljoen. per jaar) is de belangrijkste oorzaak van kindersterfte onder de 5 jaar (1 miljoen. per jaar) en morbiditeit. Belangrijke routes zijn onder meer vroegtijdige weeën (PLC), vroegtijdige prelabor-ruptuur van de foetale membranen (PPROM) en iatrogene bevalling als gevolg van pre-eclampsie en foetale groeirestrictie.

Tijdens de bevalling ondergaat het foetale amniochorionische membraan een cellulaire senescentie en worden foetale amniochorionische membraancellen (ACM-cellen) afgestoten naar de maternale circulatie. Soortgelijke kenmerken zullen naar verwachting worden gezien in gevallen met PPROM. In samenwerking met ARCEDI Biotech Aps en de University of Texas Medical Branch in Galveston, heeft de universiteit van Aarhus specifieke foetale membraancelmarkers geïdentificeerd, d.w.z. specifieke eiwitten die sterk tot expressie worden gebracht door de ACM-cellen. In de handel verkrijgbare antilichamen die specifiek zijn voor deze geïdentificeerde eiwitten, kunnen worden gebruikt om ACM-cellen uit het bloed van de moeder te isoleren. De voorlopige studies geven aan dat circulerende ACM-cellen aanwezig zijn in de tweede helft van de zwangerschap, maar niet in de eerste helft van de zwangerschap.

De onderzoekers willen door middel van immunohistochemie bevestigen dat specifieke antilichamen ACM-cellen in de foetale membranen kunnen identificeren en dat ze een platform kunnen zijn voor het isoleren van ACM-cellen uit de maternale circulatie.

Materialen en methodes:

De onderzoekers zullen ACM-cellen uit maternaal bloed isoleren door middel van Magnetic Activating Cell Sorting (MACS) met behulp van verschillende specifieke antilichamen voor ACM-cellen. De verrijkte ACM-cellen zullen worden gekleurd met behulp van fluorescerend gemerkte cytokeratine- en vimentine-antilichamen en afzonderlijk worden gesorteerd door middel van Fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS). De echte identificatie van de foetaal afgeleide ACM-cellen zal worden gedaan door middel van Short Tandem Repeat (SRT) analyse.

De antilichamen die het beste presteren, zullen worden geselecteerd op basis van pilotstudies bij zwangere vrouwen op het moment dat ze voldragen zijn en in de zwangerschapsweek 12, 20, 28 en 34, evenals tijdens de bevalling en postpartum. De eiwitexpressie en specificiteit van elk antilichaam zal worden bevestigd door immunohistochemie en helderveldmicroscopie op biopsieën van de foetale membranen, placentaweefsel en het placentabed in de baarmoeder.

Het vastgestelde protocol zal worden gebruikt om het aantal ACM-cellen in het bloed van de moeder te evalueren bij normale en pathologische zwangerschappen op cross-sectionele cohorten van voldragen zwangere vrouwen met en zonder weeën en spontane breuk van de vliezen, vrouwen met PLC vóór 34 weken zwangerschap, vrouwen met PPROM vóór 34 weken zwangerschap, en een controlegroep op zwangerschapsduur 25+0 tot 37.

Perspectieven:

In de toekomst zullen de resultaten naar verwachting de diagnostiek en behandeling van dreigende vroeggeboorte verbeteren, waardoor mortaliteit en morbiditeit bij miljoenen kinderen wereldwijd wordt voorkomen.