Buňky amniochoriální membrány v mateřské krvi jako biomarker pro předčasný porod

Cíl:

Cílem studie je 1) charakterizovat cirkulující fetální buňky amniochoriové membrány (ACM buňky) u těhotných žen a 2) zjistit, zda mohou fungovat jako biomarkery dysfunkce amniochoriové membrány, včetně rizika předčasného porodu.

Pozadí:

Celosvětově předčasný porod (15 mil. za rok) je hlavní příčinou dětské úmrtnosti do 5 let (1 mil. za rok) a nemocnost. K důležitým cestám patří předčasné porodní kontrakce (PLC), předčasná ruptura fetálních membrán (PPROM) a iatrogenní porod v důsledku preeklampsie a omezení růstu plodu.

Při porodu prochází fetální amniochoriální membrána buněčnou senescencí a vylučují buňky fetální amniochoriové membrány (ACM buňky) do mateřského oběhu. Očekává se, že podobné vlastnosti budou vidět v případech s PPROM. Ve spolupráci s ARCEDI Biotech Aps a University of Texas Medical Branch v Galvestonu identifikovala Aarhuská univerzita specifické markery fetálních membránových buněk, tj. specifické proteiny vysoce exprimované buňkami ACM. Komerčně dostupné protilátky specifické pro tyto identifikované proteiny mohou být použity k izolaci buněk ACM z mateřské krve. Předběžné studie naznačují, že cirkulující buňky ACM jsou přítomny ve druhé polovině těhotenství, ale nikoli v první polovině těhotenství.

Výzkumníci chtějí imunohistochemicky potvrdit, že specifické protilátky mohou identifikovat buňky ACM ve fetálních membránách a že mohou být platformou pro izolaci buněk ACM z mateřského oběhu.

Materiály a metody:

Vyšetřovatelé izolují buňky ACM z mateřské krve metodou Magnetic Activating Cell Sorting (MACS) s použitím různých specifických protilátek pro buňky ACM. Obohacené buňky ACM budou obarveny pomocí fluorescenčně značených protilátek proti cytokeratinu a vimentinu a individuálně tříděny pomocí fluorescenčně aktivovaného třídění buněk (FACS). Skutečná identifikace buněk ACM odvozených z plodu bude provedena analýzou krátkého tandemového opakování (SRT).

Protilátky, které fungují nejlépe, budou vybrány na základě pilotních studií na těhotných ženách v termínu a v týdnu těhotenství 12, 20, 28 a 34, stejně jako při porodu a po porodu. Proteinová exprese a specificita každé protilátky bude potvrzena imunohistochemií a mikroskopií ve světlém poli na biopsiích z fetálních membrán, placentární tkáně a placentárního lůžka v děloze.

Zavedený protokol bude použit k hodnocení počtu buněk ACM v mateřské krvi u normálních a patologických těhotenství na průřezových kohortách donošených těhotných žen s porodními kontrakcemi a bez nich a spontánní ruptury blan, žen s PLC před 34. týdnem těhotenství, žen s PPROM před 34. týdnem těhotenství a kontrolní skupina v gestačním věku 25+0 až 37.

Perspektivy:

V budoucnu se očekává, že výsledky zlepší diagnostiku a léčbu hrozícího předčasného porodu, a tím zabrání úmrtnosti a nemocnosti milionů dětí po celém světě.