Komórki błony owodniowo-kosmówkowej we krwi matki jako biomarker porodu przedwczesnego

Cel:

Celem pracy jest 1) scharakteryzowanie krążących komórek błony owodniowo-kosmówkowej płodu (komórki ACM) u kobiet w ciąży oraz 2) zbadanie, czy mogą one funkcjonować jako biomarkery dysfunkcji błony owodniowo-kosmówkowej, w tym ryzyka porodu przedwczesnego.

Tło:

Na całym świecie porody przedwczesne (15 tys. rocznie) jest główną przyczyną śmiertelności dzieci poniżej 5 roku życia (1 mln. rocznie) i zachorowalności. Do ważnych szlaków należą skurcze porodu przedwczesnego (PLC), przedwczesne pęknięcie błon płodowych przed porodem (PPROM) oraz poród jatrogenny z powodu stanu przedrzucawkowego i ograniczenia wzrostu płodu.

Podczas porodu błona owodniowo-kosmówkowa płodu ulega starzeniu komórkowemu i uwalnia komórki błony owodniowo-kosmówkowej płodu (komórki ACM) do krążenia matki. Oczekuje się, że podobne funkcje będą widoczne w przypadkach z PPROM. We współpracy z ARCEDI Biotech Aps i University of Texas Medical Branch w Galveston, Aarhus University zidentyfikował specyficzne markery komórek błony płodowej, tj. specyficzne białka o wysokiej ekspresji w komórkach ACM. Dostępne w handlu przeciwciała swoiste dla tych zidentyfikowanych białek można stosować do izolacji komórek ACM z krwi matki. Wstępne badania wskazują, że krążące komórki ACM są obecne w drugiej połowie ciąży, ale nie w pierwszej.

Badacze chcą potwierdzić za pomocą immunohistochemii, że specyficzne przeciwciała mogą identyfikować komórki ACM w błonach płodowych i że mogą być platformą do izolowania komórek ACM z krążenia matki.

Materiały i metody:

Badacze wyizolują komórki ACM z krwi matki metodą sortowania komórek aktywowanych magnetycznie (MACS) przy użyciu różnych specyficznych przeciwciał dla komórek ACM. Wzbogacone komórki ACM będą barwione przy użyciu przeciwciał cytokeratyny i wimentyny znakowanych fluorescencyjnie i sortowane indywidualnie za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją (FACS). Prawdziwa identyfikacja komórek ACM pochodzących z płodu zostanie przeprowadzona za pomocą analizy krótkich powtórzeń tandemowych (SRT).

Przeciwciała, które działają najlepiej, zostaną wybrane na podstawie badań pilotażowych na kobietach w ciąży o czasie i w 12, 20, 28 i 34 tygodniu ciąży, a także podczas porodu i po porodzie. Ekspresja białka i specyficzność każdego przeciwciała zostanie potwierdzona przez immunohistochemię i mikroskopię w jasnym polu na biopsjach błon płodowych, tkanki łożyska i łożyska łożyska w macicy.

Opracowany protokół zostanie wykorzystany do oceny liczby komórek ACM we krwi matki w ciążach prawidłowych i patologicznych na przekrojowych kohortach ciężarnych o czasie ze skurczami porodowymi i samoistnym pęknięciem błon płodowych oraz bez nich, kobiet z PLC przed 34 tygodniem ciąży, kobiet z PPROM przed 34 tygodniem ciąży i grupa kontrolna w wieku ciążowym 25+0 do 37.

Perspektywy:

Oczekuje się, że w przyszłości wyniki poprawią diagnostykę i leczenie zagrażających porodów przedwczesnych, zapobiegając w ten sposób śmiertelności i zachorowalności milionów dzieci na całym świecie.