Cellules membranaires amniochorioniques dans le sang maternel en tant que biomarqueur de l'accouchement prématuré

But:

L'objectif de l'étude est 1) de caractériser les cellules circulantes de la membrane amniochorionique fœtale (cellules ACM) chez les femmes enceintes et 2) d'étudier si elles peuvent fonctionner comme biomarqueurs du dysfonctionnement de la membrane amniochorionique, y compris le risque d'accouchement prématuré.

Arrière-plan:

À l'échelle mondiale, les naissances prématurées (15 millions. par an) est la première cause de mortalité des enfants de moins de 5 ans (1 million. par an) et la morbidité. Les voies importantes comprennent les contractions de travail prématuré (PLC), la rupture avant terme du travail des membranes fœtales (RPMP) et l'accouchement iatrogène dû à la prééclampsie et à la restriction de croissance fœtale.

Au travail, la membrane amniochorionique fœtale subit une sénescence cellulaire et libère des cellules membranaires amniochorioniques fœtales (cellules ACM) dans la circulation maternelle. Des caractéristiques similaires devraient être observées dans les cas avec PPROM. En collaboration avec ARCEDI Biotech Aps et la branche médicale de l'Université du Texas à Galveston, l'Université d'Aarhus a identifié des marqueurs cellulaires spécifiques de la membrane fœtale, c'est-à-dire des protéines spécifiques hautement exprimées par les cellules ACM. Des anticorps disponibles dans le commerce spécifiques de ces protéines identifiées peuvent être utilisés pour isoler les cellules ACM du sang maternel. Les études préliminaires indiquent que les cellules ACM circulantes sont présentes dans la seconde moitié de la grossesse mais pas dans la première moitié de la grossesse.

Les chercheurs veulent confirmer par immunohistochimie que des anticorps spécifiques peuvent identifier les cellules ACM dans les membranes fœtales, et qu'ils peuvent être une plate-forme pour isoler les cellules ACM de la circulation maternelle.

Matériels et méthodes:

Les chercheurs isoleront les cellules ACM du sang maternel par tri magnétique des cellules activatrices (MACS) en utilisant différents anticorps spécifiques pour les cellules ACM. Les cellules ACM enrichies seront colorées à l'aide d'anticorps de cytokératine et de vimentine marqués par fluorescence, et triées individuellement par tri cellulaire activé par fluorescence (FACS). La véritable identification des cellules ACM dérivées du fœtus sera effectuée par une analyse à répétition en tandem courte (SRT).

Les anticorps les plus performants seront sélectionnés sur la base d'études pilotes sur des femmes enceintes à terme et en semaine de gestation 12, 20, 28 et 34, ainsi qu'au travail et en post-partum. L'expression protéique et la spécificité de chaque anticorps seront confirmées par immunohistochimie et microscopie à fond clair sur des biopsies des membranes fœtales, du tissu placentaire et du lit placentaire dans l'utérus.

Le protocole établi sera utilisé pour évaluer le nombre de cellules ACM dans le sang maternel lors de grossesses normales et pathologiques sur des cohortes transversales de femmes enceintes à terme avec et sans contractions de travail et rupture spontanée des membranes, de femmes atteintes de PLC avant 34 semaines de gestation, de femmes avec RPMAT avant 34 semaines de gestation, et un groupe témoin à l'âge gestationnel de 25 + 0 à 37 ans.

Points de vue:

À l'avenir, les résultats devraient améliorer le diagnostic et le traitement de la menace d'accouchement prématuré, prévenant ainsi la mortalité et la morbidité chez des millions d'enfants dans le monde.