Uttryck av pro- och antiinflammatoriska cytokiner under anti-PCSK9 vid familjär hyperkolesterolemi (CytoEx-PCSK9)

Studiedesign Icke-randomiserad, icke-kontrollerad, före-efter jämförelse, kvasiexperimentell, encenterstudie.

Studiepopulation Patienter äldre än 18 år, med diagnosen statinresistent FH (SR-FH), som besöktes vid kardiologiska avdelningen, Centro Médico Nacional "20 de Noviembre ISSSTE", Mexico City. SR-FH definierades som symtomatisk kardiovaskulär sjukdom åtföljd av LDL-C-koncentration högre än 160 mg/dL trots maximalt tolererad statindos (Ito MK, McGowan MP, Moriarty PM. Hantering av familjär hyperkolesterolemi hos vuxna patienter: rekommendationer från National Lipid Association Expert Panel on Familial Hypercholesterolemia. J Clin Lipidol. 2011;5(3 Suppl):S38-S45. doi: 10.1016/j.jacl.2011.04.001.). Vi uteslöt patienter med infektioner, neoplasi eller under onkologisk terapi. Studien godkändes av forsknings-, biosäkerhets- och etikkommittén vid Centro Médico Nacional 20 de Noviembre ID 061.2019.

Klinisk-demografiska egenskaper Kliniskt-demografiska egenskaper som ålder, kön, tidigare sjukdomar och läkemedelsanvändning samlades in från en direkt intervju och verifierades genom journalen. Body mass index (BMI) beräknades som vikt/höjd2 (kg/m2). Blodtrycket erhölls medan patienten satt i sittande läge och ansågs vara medelvärdet av tre avläsningar tagna med 5 minuters mellanrum med användning av en Welch Allyn 767 mobil aneroid sfygmomanometer (Welch Allyn Inc.; Skaneateles Falls, NY, USA). Diabetes Mellitus definierades enligt riktlinjerna från American Diabetes Association med ett av följande tillstånd (upprepas för bekräftelse vid ett separat datum): 1) Hb A1C ≥ 6,5 %; 2) fasteglukos ≥ 126 mg/dl; eller 3) 2-timmars plasmaglukos ≥ 200 mg/dl under ett oralt glukostoleranstest.

Fullständigt blodvärde och lipidprofil Efter en 12-timmars fasta samlades venösa blodprover (4 ml) i BD Vacutainer®-rör (Becton, Dickinson & Co., Franklin Lakes, NJ, USA) innehållande 1,8 mg etylendiamintetraättiksyra/ ml blod. Standard blodcellsräkning utfördes omedelbart. För klinisk kemi centrifugerades enkelt blod vid 1 200 g under 5 minuter, vid 4°C, separerades i fraktioner och plasma lagrades vid -80°C före analyser. Antal blodkroppar och plasmatriglycerider, totalt kolesterol, högdensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C) och lågdensitetslipoproteinkolesterol (LDL-C) bestämdes med hjälp av rutinmässig klinisk laboratorieutrustning och en standard autoanalysator (Synchron CX®9 PRO) Clinical System; Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Aterogent index beräknades som log triglycerid/HDL-C.

Flödescytometri Blodprov bearbetades enligt standardiserat protokoll; centrifugeras sedan för att erhålla leukocytpopulationen. Efter tre tvättar fixerades cellerna i 4% paraformaldehyd och lagrades i 12 timmar. Flödescytometrianalys (MACSQuant Analyzer 10 - Miltenyi Biotec) utfördes i totalt 1 000 000 händelser som samlades in för varje analys, och motsvarande isotypkontroller användes för att ställa in lämpliga regioner. Cellsubpopulationer identifierades av deras specifika markörkombination (CD14+, CD163+ för M1-makrofager; CD14+, CD206+ för M2-makrofager; CD16+, CXCR4-receptor och CD16+, CXCR2 för monocyter.

Plasmalösliga biomarkörer En alikvot av blodprov centrifugerades omedelbart vid 5000 rpm/5 min och plasma uppsamlades. Analyter (fraktalin, IL-1, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, MCP-1 och TNF-alfa), med hjälp av kommersiellt tillgänglig multiplexeringsanalys (HCYTOMAG-60-08K, MILLIPLEX MAP Human Cytokine/ Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay Merc, Millipore Massachusetts, USA), och följande tillverkarens instruktioner; och läsa i Multiplex-läsare (MAGPIX System, Millipore, Austin, Texas).

Uppföljning och studieslutpunkter Uppföljning utfördes efter 6 månaders terapi, genom programmerade medicinska utvärderingar och blodanalyser. Primär endpoint bestod av modifiering av: 1) serumlipider; medan sekundära slutpunkter inkluderade: 1) pro-inflammatoriska mediatorer (neutrofiler, lymfocyter, NtLR, lösliga pro-inflammatoriska cytokiner); och 2) aterogent index.

Statistisk analys

Kvalitativa data återupptogs som medelvärde ± SD; medan kategoriska data som n(%).Envägs T-test tillämpades. Statistisk signifikans ansågs om p <0,05.