DNA 定量技术作为线粒体疾病的解释工具

2622/5000 线粒体疾病 (MM) 是最常见的代谢性疾病。 由于这些病理学在临床上非常异质，因此只有核基因或线粒体 DNA 突变的鉴定才能确认诊断。

通过高通量测序 (NGS) 对 mtDNA 进行全面研究是诊断方法的第一步。 最近引入的这项革命性新技术大大提高了突变识别的效率。 然而，除了已知的致病性突变外，NGS 还揭示了许多意义目前未知的变异。 因此，获得可靠诊断的一个主要挑战是解释这些新的罕见变异的临床影响，这被证明是非常困难的。

致病性标准允许对从良性到致病性的变异进行分类。 主要的致病性标准之一是异质性水平与组织或细胞受累的良好相关性。 事实上，mtDNA 突变通常是异质性的，这对应于同一细胞或组织中正常分子和突变分子的共存，受影响最严重的组织具有高突变率。 在受累患者的肌肉活检中，纤维通常存在细胞色素 c 氧化酶缺陷（COX 阴性），这可以在免疫组织化学中得到证明。 单纤维研究允许分离有缺陷的纤维并量化变体的异质率。 与没有缺陷的纤维不同，COX 阴性纤维中存在高水平的异质性是支持这种变异致病性的有力论据。 目前，该技术并未在诊断实验室中常规使用，只是偶尔在某些实验室的研究框架中使用。 这是一项繁重的技术，包括对各种肌肉纤维进行激光显微切割的第一阶段，然后是对每根纤维的变体进行第二步量化。 第二步需要特别关注每个已识别的变体。

这项试点研究的目的是开发一种新技术，用于量化通过 NGS 激光显微切割分离的单纤维异质性。 这与变体类型无关，将避免为每个已识别的新变体进行长时间和昂贵的调整，从而促进其使用