益生菌和维生素 D 补充剂对 MMA 运动员运动表现的影响。

该研究被设计为随机双盲安慰剂对照临床试验，为期 4 周的益生菌和维生素 D 干预期。 该研究于 2020 年 12 月至 2021 年 3 月在格但斯克医科大学生物能量学和运动生理学系（波兰格但斯克）进行。 研究人员将招募 25 名训练有素的男性综合格斗运动员。 登记的运动员将按照随机和盲法规则，使用 Excel 随机数生成器，按照 1:1 的比例随机分配接受益生菌 (PRO) 或匹配安慰剂 (PL)。

研究产品是维生素 D、Juvit d3" 和益生菌混合物、Sanprobi Active & Sport"，每粒胶囊含有 2.5 x 109 CFU/g（一粒胶囊中≥5 亿 CFU）的五种乳酸菌菌株（乳双歧杆菌 W51、短乳杆菌 W63、嗜酸乳杆菌 W22、双歧双歧杆菌 W23 和乳酸乳球菌 W5）；玉米淀粉、麦芽糖糊精、植物蛋白和羟丙基乙基纤维素片剂的包衣。 含有 40 毫克麦芽糖糊精和植物蛋白的外观相同的安慰剂胶囊将用于卡特尔。 每包益生菌或安慰剂含有 40 粒胶囊。 在基线访问时，所有运动员都将收到一瓶 Juvit d3 以及三包外观相同的益生菌或安慰剂，具体取决于随机分配。 参与者将被告知每天随餐服用 4 粒胶囊和 3500 国际单位的维生素 D。

在基线访问时，所有受试者都将收到研究产品以及补充剂和饮食摄入量的日记以及训练日记。 为了可靠和适当地执行所有程序，PRE 和 POST 访问将分两天进行。 这些分开访问之间的时间窗口是 3-5 天。 参与者将在为期 4 周的干预期开始 (PRE) 和结束 (POST) 时向格但斯克医科大学报告。 在两次访问期间，运动员将完成身体成分评估、食物频率问卷 (FFQ)、心肺健康评估，并将提供粪便样本。 此外，将在运动测试前后抽取血样，以评估选定的炎症标志物以及肌肉损伤状态和乳酸利用水平。 最后一次采血将在无氧运动测试24小时后进行。 参与者将被指示继续他们的培训计划。 运动员将有义务每周至少进行 5 次耐力训练，以保持研究的竞争性。

将评估身体成分分析，以检测身体脂肪量和无脂肪量的潜在变化。 每个组织的水平将与肠道细菌含量进行比较。 研究人员将尝试解释肠道微生物组成是否会影响身体组成，以及哪些细菌门可能导致这种潜在变化。 该目标将通过多频生物电阻抗分析（BIA）获得。

将使用 wasserman 方案通过自行车测力计 ER900 Jaeger 评估有氧健身能力。 测试之前将进行 5 分钟的 100 W 负载热身，然后休息 5 分钟。 测试将以 125 W 的负荷和 60 ± 5 RPM / min 的频率开始，负荷将每 1 分钟增加 25 W。测试将进行直到达到最大个人运动负荷，即无力在保持指定频率或缺乏的情况下继续运动，增加摄氧量。 在检查过程中，研究人员将监测摄氧量和呼出的二氧化碳量、每分钟肺通气量以及心率。 有氧测试将在无氧评估前 3-5 天进行，作为 PRE 和 POST 访问的一部分。

无氧健康评估将通过 Wingate 无氧测试 (WAnT) 使用 cycloergometer MCE_v_5.1 获得。 考试前，鞍座将进行单独调整，然后运动员将以50W的负荷和60转/分钟的频率进行5分钟的热身，并在3分钟和4分钟内进行两次10秒的加速。 热身后休息3分钟。 负荷将单独调整，将达到运动员体重的 7.5%。 在“开始”命令下，运动员将以坐姿进行 30 秒的冲刺，试图尽快达到峰值功率并在整个过程中保持峰值功率。 测试结束后，将有 2 分钟的活动休息时间。 测试将进行 3 次。 WAnT 评估最大、最小和平均功率、达到最大功率的时间和相对功率下降。

血样将在 Wingate 测试期间的两个时间点采集：干预前和干预后，条件相同。 来自手臂静脉的血样将由专科护士抽取到两个适当的标准化试管中，分别含有 K2EDTA 和凝血激活剂。 每次最多采集 4 毫升血液。 将在运动测试开始前、测试结束后 30 分钟和测试结束后 24 小时间接采集血样。 然后将血液以 3000 x g 离心以分离血清和血浆。 将材料置于单独标记的微量离心管中并储存在-80°C以备后用测定。 所有分析将在研究结束时在格但斯克医科大学进行。

收集的静脉血样将在格但斯克医科大学进行分析。 研究人员将使用市售的酶联免疫吸附测定 (ELISA) 试剂盒评估血清促炎细胞因子（IL-6 和 TNF-α）以及抗炎细胞因子（L-2 和 IL-15）的水平。 为了评估肌肉损伤的血浆水平，研究人员将使用市售试剂盒通过动力学方法确定肌酸激酶 (CK) 的活性。

每次都会采集毛细管血样，由专业护士进行 Wingate 测试，将 100 µL 的量放入无菌刻度微毛细管中。 将对指尖毛细血管血进行测量。 然后将血液转移到含有500 µl 0.6 mol高氯酸的微量离心管中，离心并储存在-20℃直至进行测定。 毛细血管血将在运动测试前和测试后2-3、15、30和60分钟内采集。 收集到的毛细血管血样将在格但斯克医科大学进行分析。 分析的目的是确定样本中的乳酸水平。 乳酸水平的测定将根据反应速度使用比色动力学方法进行。

受试者将在干预期前后间接提供粪便样本。 材料将由参与者收集到一个特殊的标准化容器中。 粪便样本将采集两次：测试前和干预结束时。 粪便样本将立即冷冻并储存在-80摄氏度，然后在相同条件下运送至独立实验室进行评估。 收集的粪便样本将使用新一代测序方法对肠道微生物群进行定量和定性分析。 将分析 16SrRNA 基因的选定高变区。 微生物组的组成将主要以 alpha 和 beta 多样性为特征。 一个样本 (alpha) 中微生物群落的多样性将使用多个指标进行测量，例如 Chao1、ACE、Shannon 和 inverted Simpson。 所有指标将根据原始 NGS 数据计算（无需任何预处理，例如 去除稀有物种）并根据变量的分布使用标准统计检验在测试组和对照组之间进行比较。 样本之间微生物群落的多样性 (beta) 将使用差异指标 (Bray-Curtis) 和距离指标（UniFrac 加权 - 基于系统发育的指标）进行测量。 将为所有样本对计算相似性指标并将其存储在相异性矩阵中。 Bray-Curtis 将执行置换多元方差分析 (PERMANOVA) 和加权 UniFrac 差异矩阵，以评估组级别的差异。 Beta 多样性分析将在监督和无人值守的数据预处理之前进行，例如去除稀有物种和使用中值测序深度作为比例因子的数字转换。 收集的粪便样本将在存在钙卫蛋白、连蛋白和 IFABP 等肠道渗透参数以及短链脂肪酸 (SCFA) 等细菌代谢产物的情况下进行分析。

所有获得的数据将使用统计程序 Statistica 13 进行分析。 统计分析将仅包括完整数据，来自完成所有干预期和所有研究程序的受试者。 之前将使用 Shapiro-Wilk W 检验检查数据的正常性。 在数据异常分布的情况下，将使用它们的自然对数。 研究人员通常会使用描述性统计来获取背景信息，并使用 95% 置信区间的平均值来检查分析参数的趋势。 根据基础数据的正态性，将进行参数或非参数测试。 统计显着性设置为 p < 0.05。