O efeito da suplementação de probióticos e vitamina D no desempenho esportivo em atletas de MMA.

O estudo foi concebido como um ensaio clínico randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, com probióticos de 4 semanas e período de intervenção com vitamina D. O estudo é realizado entre dezembro de 2020 e março de 2021, na Universidade Médica de Gdańsk, Departamento de Bioenergética e Fisiologia do Exercício (Gdańsk, Polônia). Os pesquisadores vão inscrever 25 atletas masculinos de artes marciais mistas treinados. Os atletas inscritos serão aleatoriamente designados para receber probiótico (PRO) ou placebo correspondente (PL) na proporção de 1:1, usando o gerador de números aleatórios do Excel, seguindo a regra do aleatório e da cegueira.

O produto do estudo é uma mistura de vitamina D ,,Juvit d3" e probiótico ,,Sanprobi Active & Sport", contendo 2,5 x 109 UFC/g por cápsula (≥500 milhões de UFC em uma cápsula) de cinco cepas de bactérias do ácido lático (Bifidobacterium lactis W51, Lactobacillus brevis W63, Lactobacillus acidophilus W22, Bifidobacterium bifidum W23 e Lactococcus lactis W5); amido de milho, maltodextrina, proteínas vegetais e revestimento de comprimidos de hidroxipropil etilcelulose. Cápsulas placebo de aparência idêntica contendo 40 mg de maltodextrina e proteínas vegetais serão utilizadas para cartel. Cada embalagem de probiótico ou placebo contém 40 cápsulas. Todos os atletas receberão um frasco de Juvit d3, bem como três embalagens idênticas de probióticos ou placebo, dependendo da alocação aleatória, na visita inicial. Os participantes serão informados a tomar 4 cápsulas com as refeições e 3500 UI de vitamina d diariamente.

Na visita inicial, todos os indivíduos receberão o produto do estudo, bem como um diário de suplementos e ingestão alimentar e diário de treinamento. As visitas PRÉ e PÓS serão divididas em dois dias para a realização confiável e adequada de todos os procedimentos. A janela de tempo entre essas visitas divididas é de 3 a 5 dias. Os participantes se apresentarão à Universidade Médica de Gdańsk no início (PRE) e no final (POST) do período de intervenção de 4 semanas. Durante as duas visitas, os atletas preencherão uma avaliação da composição corporal, questionário de frequência alimentar (FFQ), avaliação da aptidão cardiorrespiratória e fornecerão amostras fecais. Além disso, as amostras de sangue serão coletadas antes e depois dos testes esportivos, para avaliar marcadores selecionados de inflamação, estado de dano muscular e nível de utilização de lactato. A última coleta de sangue será realizada após 24 horas de teste anaeróbico esportivo. O participante será instruído a continuar seu programa de treinamento. Os atletas serão obrigados a realizar pelo menos 5 treinos de resistência por semana para manter o caráter competitivo do estudo.

A análise da composição corporal será avaliada para detectar possíveis alterações na massa de gordura corporal e na massa isenta de gordura. O nível de cada tecido será comparado ao conteúdo de bactérias intestinais. Os investigadores tentarão explicar se a composição do microbioma intestinal pode afetar a composição corporal e quais filos bacterianos são responsáveis ​​por possíveis mudanças em potencial. Este alvo será obtido através da análise de impedância bioelétrica (BIA) multifrequência.

A capacidade de condicionamento aeróbico será avaliada por meio da bicicleta ergométrica ER900 Jaeger utilizando o protocolo wasserman. O teste será precedido de 5 minutos de aquecimento com carga de 100 W, seguido de 5 minutos de descanso. O teste será iniciado com uma carga de 125 W e frequência de 60 ± 5 RPM/min, a carga será aumentada a cada 1 minuto em 25 W. O teste será realizado até que seja atingida a carga máxima do exercício individual, ou seja, a incapacidade continuar o exercício mantendo a frequência especificada ou falta de aumento do consumo de oxigênio. Durante o exame, os investigadores monitorarão a quantidade de oxigênio consumido e o dióxido de carbono exalado, a ventilação pulmonar por minuto e a frequência cardíaca. O teste aeróbico será realizado 3-5 dias antes da avaliação anaeróbica como parte das visitas PRÉ e PÓS.

A avaliação da aptidão anaeróbia será obtida pelo Wingate Anaerobic Test (WAnT) utilizando o cicloergômetro MCE_v_5.1. Antes do exame, o selim será ajustado individualmente, em seguida os atletas realizarão um aquecimento de 5 minutos com carga de 50 W e frequência de 60 RPM/min, com duas acelerações de 10 segundos em 3 e 4 minutos. Após o aquecimento, haverá um descanso de 3 minutos. A carga será ajustada individualmente e será de 7,5% do peso corporal do atleta. Ao comando “start”, o atleta realizará um sprint de 30 segundos na posição sentada, tentando atingir o pico de potência o mais rápido possível e mantê-lo durante toda a duração do esforço. Após o teste, haverá uma pausa ativa de 2 minutos. O teste será realizado 3 vezes. O WAnT avalia a potência máxima, mínima e média, tempo para atingir a potência máxima e queda de potência relativa.

As amostras de sangue serão coletadas durante os testes de Wingate nos dois momentos: PRÉ e PÓS intervenção, nas mesmas condições. Amostras de sangue da veia do braço serão coletadas por uma enfermeira especialista em dois tubos padronizados apropriados contendo respectivamente K2EDTA e ativador de coagulação. Cada vez serão coletados até 4 ml de sangue. Amostras de sangue serão coletadas indiretamente antes do início dos testes ergométricos, 30 minutos após o término dos testes e 24 horas após o término dos testes. O sangue será então centrifugado a 3000 x g para separar soro e plasma. O material será colocado em tubos de microcentrífuga etiquetados separadamente e armazenados a -80°C para posteriores determinações. Todas as análises serão realizadas no final do estudo na Medical University em Gdańsk.

As amostras de sangue venoso coletadas serão submetidas a análise na Universidade Médica de Gdańsk. Os pesquisadores avaliarão o nível de citocinas pró-inflamatórias séricas (IL-6 e TNF-α), bem como citocinas anti-inflamatórias (L-2 e IL-15) usando kits de ensaio imunoenzimático (ELISA) comercialmente disponíveis. Para avaliar o nível plasmático de dano muscular, os investigadores determinarão a atividade da creatina quinase (CK) por meio do método cinético, usando o kit disponível comercialmente.

A cada vez serão colhidas amostras de sangue capilar, sendo realizados testes de Wingate, por enfermeira especializada, na quantidade de 100 µL, em microcapilar graduado estéril. As medições serão realizadas no sangue capilar da ponta do dedo. O sangue será então transferido para um tubo de microcentrífuga contendo 500 µl de ácido perclórico 0,6 mol, centrifugado e armazenado a -20 graus C até a realização da dosagem. Sangue capilar será coletado antes do teste de esforço e 2-3, 15, 30 e 60 minutos após o teste. Amostras de sangue capilar coletadas serão submetidas a análise na Universidade Médica de Gdańsk. O objetivo da análise será determinar o nível de lactato nas amostras coletadas. A determinação do nível de lactato será realizada pelo método cinético colorimétrico, baseado na velocidade de reação.

Os sujeitos fornecerão uma amostra fecal indiretamente antes e após o período de intervenção. O material será recolhido pelos participantes em um recipiente especial padronizado. Uma amostra de fezes será coletada duas vezes: antes do teste e no final da intervenção. As amostras de fezes serão imediatamente congeladas e armazenadas a -80 graus Celsius, em seguida, nas mesmas condições, transportadas para avaliação por laboratório independente. As amostras fecais coletadas serão submetidas ao conteúdo quantitativo e qualitativo da microbiota intestinal com a utilização do método de sequenciamento de nova geração. Serão analisadas regiões hipervariáveis ​​selecionadas do gene 16SrRNA. A composição do microbioma será caracterizada principalmente pela diversidade alfa e beta. A diversidade de comunidades microbianas em uma amostra (alfa) será medida usando vários indicadores, como Chao1, ACE, Shannon e Simpson invertido. Todos os indicadores serão calculados com base nos dados NGS brutos (sem qualquer pré-processamento, por exemplo, remoção de espécies raras) e comparados entre o grupo de teste e controle usando um teste estatístico padrão, dependendo da distribuição de variáveis. A diversidade de comunidades microbianas entre amostras (beta) será medida usando o indicador de diferença (Bray-Curtis) e métricas de distância (UniFrac ponderado - uma métrica baseada em filogênese). Indicadores de similaridade serão calculados para todos os pares de amostras e armazenados em matrizes de dissimilaridade. Bray-Curtis realizará análise multivariada de permutação de variância (PERMANOVA) e matrizes de diferenças UniFrac ponderadas para avaliar as diferenças no nível do grupo. A análise da diversidade beta será precedida pelo pré-processamento de dados supervisionado e autônomo, como a remoção de espécies raras e transformação de números usando a profundidade de sequenciamento mediana como fator de escala. Amostras fecais coletadas serão analisadas no contexto da presença de parâmetros de permeabilidade intestinal, como calprotectina, zonulina e IFABP, bem como produtos do metabolismo bacteriano, como ácidos graxos de cadeia curta (SCFA).

Todos os dados obtidos serão analisados ​​por meio do programa estatístico Statistica 13. Para análise estatística serão incluídos apenas os dados completos, dos sujeitos que completaram todo o período de intervenção, bem como todos os procedimentos do estudo. Os dados serão previamente verificados quanto à normalidade usando Shapiro-Wilk W-test. No caso de distribuição anormal dos dados, serão utilizados seus logaritmos naturais. Os pesquisadores farão estatísticas descritivas usuais para obter informações básicas, bem como para examinar as tendências nos parâmetros analisados ​​com valores médios de intervalo de confiança de 95%. Dependendo da normalidade dos dados subjacentes, serão realizados testes paramétricos ou não paramétricos. A significância estatística é estabelecida em p < 0,05.