El efecto de los probióticos y la suplementación con vitamina D sobre el rendimiento deportivo en atletas de MMA.

El estudio está diseñado como un ensayo clínico aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo con probióticos de 4 semanas y un período de intervención de vitamina D. El estudio se lleva a cabo entre diciembre de 2020 y marzo de 2021, en la Universidad Médica de Gdańsk, Departamento de Bioenergética y Fisiología del Ejercicio (Gdańsk, Polonia). Los investigadores inscribirán a 25 atletas masculinos entrenados en artes marciales mixtas. Los atletas inscritos serán asignados aleatoriamente para recibir probióticos (PRO) o placebo correspondiente (PL) en una proporción de 1:1, utilizando un generador de números aleatorios de Excel, siguiendo la regla del azar y la ceguera.

El producto del estudio es una mezcla de vitamina D, Juvit d3" y probióticos, Sanprobi Active & Sport", que contiene 2,5 x 109 CFU/g por cápsula (≥500 millones de CFU en una cápsula) de cinco cepas de bacterias del ácido láctico. (Bifidobacterium lactis W51, Lactobacillus brevis W63, Lactobacillus acidophilus W22, Bifidobacterium bifidum W23 y Lactococcus lactis W5); recubrimiento de tabletas de almidón de maíz, maltodextrina, proteínas vegetales y hidroxipropil etilcelulosa. Para el cartel se utilizarán cápsulas de placebo de aspecto idéntico que contienen 40 mg de maltodextrina y proteínas vegetales. Cada paquete de probiótico o placebo contiene 40 cápsulas. Todos los atletas recibirán una botella de Juvit d3, así como tres paquetes de probióticos o placebo de aspecto idéntico, según la asignación aleatoria, en la visita inicial. Se informará a los participantes que tomen 4 cápsulas con las comidas y 3500 UI de vitamina D al día.

En la visita inicial, todos los sujetos recibirán el producto del estudio, así como un diario de suplementos, ingesta dietética y diario de entrenamiento. Tanto la visita PRE como la POST se fraccionarán en dos días para la correcta y fiable realización de todos los trámites. La ventana de tiempo entre estas visitas divididas es de 3 a 5 días. Los participantes se presentarán en la Universidad Médica de Gdańsk al principio (PRE) y al final (POST) del período de intervención de 4 semanas. Durante ambas visitas, los atletas completarán una evaluación de la composición corporal, un cuestionario de frecuencia de alimentos (FFQ), una evaluación de la aptitud cardiorrespiratoria y proporcionarán muestras fecales. Además, las muestras de sangre se extraerán antes y después de las pruebas deportivas, para evaluar marcadores seleccionados de inflamación, estado de daño muscular y nivel de utilización de lactato. La última extracción de sangre se realizará después de 24 horas de prueba deportiva anaeróbica. Se le indicará al participante que continúe con su programa de capacitación. Los atletas estarán obligados a realizar al menos 5 entrenamientos de resistencia por semana para mantener el carácter competitivo del estudio.

El análisis de la composición corporal se evaluará para detectar posibles cambios en la masa grasa corporal y la masa libre de grasa. El nivel de cada tejido se comparará con el contenido de bacterias intestinales. Los investigadores intentarán explicar si la composición del microbioma intestinal puede afectar la composición corporal y qué filos bacterianos son responsables de los posibles cambios. Este objetivo se obtendrá mediante análisis de impedancia bioeléctrica (BIA) multifrecuencia.

La capacidad aeróbica se evaluará mediante bicicleta ergométrica ER900 Jaeger utilizando el protocolo wasserman. La prueba estará precedida por un calentamiento de 5 minutos con una carga de 100 W, seguido de un descanso de 5 minutos. La prueba comenzará con una carga de 125 W y una frecuencia de 60 ± 5 RPM/min, la carga se incrementará cada 1 minuto en 25 W. La prueba se realizará hasta alcanzar la carga máxima de ejercicio individual, es decir, la incapacidad para continuar el ejercicio manteniendo la frecuencia especificada o la falta de aumento del consumo de oxígeno. Durante el examen, los investigadores controlarán la cantidad de consumo de oxígeno y dióxido de carbono exhalado, la ventilación pulmonar por minuto y la frecuencia cardíaca. La prueba aeróbica se realizará de 3 a 5 días antes de la evaluación anaeróbica como parte de las visitas PRE y POST.

La evaluación de la aptitud anaeróbica se obtendrá mediante la prueba anaeróbica de Wingate (WAnT) utilizando el cicloergómetro MCE_v_5.1. Antes del examen, se ajustará individualmente el sillín, luego los atletas realizarán un calentamiento de 5 minutos a 50 W de carga y una frecuencia de 60 RPM/min, con dos aceleraciones de 10 segundos en 3 y 4 minutos. Después del calentamiento, habrá un descanso de 3 minutos. La carga se ajustará individualmente y ascenderá al 7,5% del peso corporal del atleta. A la orden de "inicio", el atleta realizará un sprint de 30 segundos en una posición sentada, tratando de alcanzar el pico de potencia lo más rápido posible y mantenerlo durante toda la duración del esfuerzo. Después de la prueba, habrá un descanso activo de 2 minutos. La prueba se realizará 3 veces. El WAnT evalúa la potencia máxima, mínima y media, el tiempo para alcanzar la potencia máxima y la caída de potencia relativa.

Las muestras de sangre serán recolectadas durante las pruebas de Wingate en los dos puntos de tiempo: PRE y POST intervención, en las mismas condiciones. Una enfermera especializada extraerá muestras de sangre de la vena del brazo en dos tubos estandarizados apropiados que contienen respectivamente K2EDTA y activador de la coagulación. Cada vez se recogerán hasta 4 ml de sangre. Las muestras de sangre se tomarán indirectamente antes del inicio de las pruebas de esfuerzo, 30 minutos después de la finalización de las pruebas y 24 horas después de la finalización de las pruebas. Luego, la sangre se centrifugará a 3000 x g para separar el suero y el plasma. El material se colocará en tubos de microcentrífuga etiquetados por separado y se almacenará a -80 °C para determinaciones posteriores. Todos los análisis se realizarán al final del estudio en la Universidad de Medicina de Gdańsk.

Las muestras de sangre venosa recolectadas se someterán a análisis en la Universidad Médica de Gdańsk. Los investigadores evaluarán el nivel de citocinas proinflamatorias séricas (IL-6 y TNF-α), así como de citocinas antiinflamatorias (L-2 e IL-15), utilizando kits de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) disponibles en el mercado. Para evaluar el nivel plasmático de daño muscular, los investigadores determinarán la actividad de la creatina quinasa (CK) a través del método cinético, utilizando el kit comercialmente disponible.

Se tomarán muestras de sangre capilar cada vez que se realicen pruebas de Wingate, por una enfermera especializada, en una cantidad de 100 µL, en un microcapilar estéril graduado. Las mediciones se realizarán en sangre capilar de la yema del dedo. Luego, la sangre se transferirá a un tubo de microcentrífuga que contiene 500 µl de ácido perclórico 0,6 mol, se centrifugará y almacenará a -20 grados C hasta que se lleve a cabo la determinación. Se recolectará sangre capilar antes de la prueba de esfuerzo y en 2-3, 15, 30 y 60 minutos después de la prueba. Las muestras de sangre capilar recolectadas se someterán a análisis en la Universidad Médica de Gdańsk. El objetivo del análisis será determinar el nivel de lactato en las muestras tomadas. La determinación del nivel de lactato se realizará utilizando el método cinético colorimétrico, basado en la velocidad de reacción.

Los sujetos proporcionarán una muestra fecal indirectamente antes y después del período de intervención. El material será recogido por los participantes en un contenedor especial estandarizado. Se tomará una muestra de heces dos veces: antes de la prueba y al final de la intervención. Las muestras de heces se congelarán y almacenarán inmediatamente a -80 grados centígrados, luego, en las mismas condiciones, se transportarán a la evaluación por un laboratorio independiente. Las muestras fecales recolectadas se someterán al contenido cuantitativo y cualitativo de la microbiota intestinal utilizando el método de secuenciación de nueva generación. Se analizarán regiones hipervariables seleccionadas del gen 16SrRNA. La composición del microbioma se caracterizará principalmente por la diversidad alfa y beta. La diversidad de las comunidades microbianas en una muestra (alfa) se medirá utilizando varios indicadores, como Chao1, ACE, Shannon y Simpson invertido. Todos los indicadores se calcularán sobre la base de datos NGS sin procesar (sin ningún procesamiento previo, p. eliminación de especies raras) y se compararon entre el grupo de prueba y el de control usando una prueba estadística estándar dependiendo de la distribución de variables. La diversidad de comunidades microbianas entre muestras (beta) se medirá utilizando el indicador de diferencia (Bray-Curtis) y métricas de distancia (UniFrac ponderado, una métrica basada en la filogénesis). Los indicadores de similitud se calcularán para todos los pares de muestras y se almacenarán en matrices de disimilitud. Bray-Curtis realizará un análisis de varianza multivariante de permutación (PERMANOVA) y matrices de diferencia UniFrac ponderadas para evaluar las diferencias a nivel de grupo. El análisis de diversidad beta estará precedido por un preprocesamiento de datos supervisado y desatendido, como la eliminación de especies raras y la transformación de números utilizando la profundidad de secuenciación mediana como factor de escala. Las muestras fecales recolectadas se analizarán en el contexto de la presencia de parámetros de permeabilidad intestinal como calprotectina, zonulina e IFABP, así como productos del metabolismo bacteriano como los ácidos grasos de cadena corta (AGCC).

Todos los datos obtenidos serán analizados utilizando el programa estadístico Statistica 13. Para el análisis estadístico se incluirán solo datos completos, de sujetos que completen todo el período de intervención, así como todos los procedimientos del estudio. Se comprobará previamente la normalidad de los datos mediante la prueba W de Shapiro-Wilk. En el caso de datos distribuidos anormalmente, se utilizarán sus logaritmos naturales. Los investigadores utilizarán estadísticas descriptivas habituales para obtener información de fondo, así como para examinar las tendencias en los parámetros analizados con valores medios del intervalo de confianza del 95 %. Dependiendo de la normalidad de los datos subyacentes, se realizarán pruebas paramétricas o no paramétricas. La significación estadística se establece en p < 0,05.