Влияние пробиотиков и добавок витамина D на спортивные результаты спортсменов ММА.

Исследование разработано как рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое исследование с 4-недельным периодом воздействия пробиотиков и витамина D. Исследование проводится в период с декабря 2020 года по март 2021 года в Гданьском медицинском университете, на кафедре биоэнергетики и физиологии упражнений (Гданьск, Польша). Исследователи зачислят 25 тренированных мужчин-спортсменов смешанных единоборств. Зарегистрированные спортсмены будут случайным образом распределены для получения пробиотика (PRO) или соответствующего плацебо (PL) в соотношении 1: 1 с использованием генератора случайных чисел Excel в соответствии с правилом случайности и слепоты.

Исследуемый продукт представляет собой смесь витамина D «Ювит д3» и пробиотиков «Санпроби Актив и Спорт», содержащая 2,5 х 109 КОЕ/г в капсуле (≥500 млн КОЕ в одной капсуле) пяти штаммов молочнокислых бактерий. (Bifidobacterium lactis W51, Lactobacillus brevis W63, Lactobacillus acidophilus W22, Bifidobacterium bifidum W23 и Lactococcus lactis W5); кукурузный крахмал, мальтодекстрин, растительные белки и покрытие таблеток гидроксипропилэтилцеллюлозой. Идентичные на вид плацебо-капсулы, содержащие 40 мг мальтодекстрина и растительные белки, будут использоваться для картеля. Каждая упаковка пробиотика или плацебо содержит 40 капсул. Все спортсмены получат бутылку Juvit d3, а также три идентичные упаковки пробиотиков или плацебо, в зависимости от случайного распределения, при исходном посещении. Участники будут проинформированы о необходимости принимать по 4 капсулы во время еды и 3500 МЕ витамина D в день.

При исходном посещении все субъекты получат исследуемый продукт, а также дневник добавок и диетического питания и дневник тренировок. Визиты PRE и POST будут разделены на два дня для надежного и надлежащего выполнения всех процедур. Временное окно между этими разделенными визитами составляет 3-5 дней. Участники будут отчитываться перед Гданьским медицинским университетом в начале (PRE) и конце (POST) 4-недельного периода вмешательства. Во время обоих посещений спортсмены проведут оценку состава тела, опросник частоты приема пищи (FFQ), оценку кардио-респираторного состояния и предоставят образцы кала. Кроме того, образцы крови будут взяты до и после спортивных тестов для оценки выбранных маркеров воспаления, а также состояния повреждения мышц и уровня утилизации лактата. Последний забор крови будет проведен через 24 часа анаэробного спортивного теста. Участнику будет предложено продолжить программу обучения. Спортсмены будут обязаны выполнять не менее 5 тренировок на выносливость в неделю, чтобы сохранить соревновательный характер исследования.

Будет проведен анализ состава тела для выявления потенциальных изменений жировой и безжировой массы тела. Уровень каждой ткани будет сравниваться с содержанием кишечных бактерий. Исследователи попытаются объяснить, может ли состав кишечного микробиома влиять на состав тела и какие типы бактерий несут ответственность за возможные изменения. Эта цель будет получена с помощью многочастотного анализа биоэлектрического импеданса (BIA).

Аэробные способности будут оцениваться с помощью велоэргометра ER900 Jaeger с использованием протокола Вассермана. Тесту будет предшествовать 5-минутная разминка с нагрузкой 100 Вт, после чего следует 5-минутный отдых. Испытание начнется при нагрузке 125 Вт и частоте 60 ± 5 об/мин, нагрузка будет увеличиваться каждую 1 минуту на 25 Вт. Испытание будет проводиться до достижения максимальной индивидуальной физической нагрузки, т.е. неспособности продолжать упражнение при сохранении указанной частоты или отсутствии увеличения потребления кислорода. Во время обследования исследователи будут контролировать количество поглощаемого кислорода и выдыхаемого углекислого газа, минутную вентиляцию легких, а также частоту сердечных сокращений. Аэробный тест будет проводиться за 3-5 дней до анаэробной оценки в рамках визитов ДО и ПОСЛЕ.

Анаэробную пригодность оценивают с помощью анаэробного теста Вингейта (WAnT) с использованием циклоэргометра MCE_v_5.1. Перед обследованием седло будет индивидуально отрегулировано, затем спортсмены выполнят 5-минутную разминку при нагрузке 50 Вт и частоте 60 об/мин, с двумя 10-секундными ускорениями за 3 и 4 минуты. После разминки будет 3-минутный отдых. Нагрузка будет подобрана индивидуально и составит 7,5% от массы тела спортсмена. По команде «старт» спортсмен выполняет 30-секундный спринт в положении сидя, стараясь как можно быстрее достичь пиковой мощности и поддерживать ее на протяжении всего усилия. После теста будет активный 2-минутный перерыв. Испытание будет проведено 3 раза. WAnT оценивает максимальную, минимальную и среднюю мощность, время достижения максимальной мощности и относительное падение мощности.

Образцы крови будут собираться во время тестов Вингейта в два момента времени: ДО и ПОСЛЕ вмешательства, в тех же условиях. Образцы крови из вены руки будут взяты специализированной медсестрой в две соответствующие стандартизированные пробирки, содержащие, соответственно, K2EDTA и активатор свертывания крови. Каждый раз будет собираться до 4 мл крови. Образцы крови будут взяты косвенно перед началом тестов с физической нагрузкой, через 30 минут после окончания тестов и через 24 часа после окончания тестов. Затем кровь центрифугируют при 3000 g для разделения сыворотки и плазмы. Материал будет помещен в отдельно маркированные микроцентрифужные пробирки и храниться при температуре -80 ° C для последующих определений. Все анализы будут выполнены в конце обучения в Медицинском университете в Гданьске.

Собранные образцы венозной крови будут подвергнуты анализу в Гданьском медицинском университете. Исследователи будут оценивать уровень сывороточных провоспалительных цитокинов (IL-6 и TNF-α), а также противовоспалительных цитокинов (L-2 и IL-15) с использованием имеющихся в продаже наборов для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Для оценки уровня повреждения мышц в плазме исследователи будут определять активность креатинкиназы (СК) кинетическим методом с использованием имеющегося в продаже набора.

Образцы капиллярной крови будут браться каждый раз, тесты Вингейта выполняются специализированной медсестрой в количестве 100 мкл в стерильный градуированный микрокапилляр. Измерения будут выполняться на капиллярной крови из кончика пальца. Затем кровь переносят в микроцентрифужную пробирку, содержащую 500 мкл 0,6 моль хлорной кислоты, центрифугируют и хранят при -20°С до проведения определения. Капиллярную кровь забирают до пробы с физической нагрузкой и через 2-3, 15, 30 и 60 минут после пробы. Собранные образцы капиллярной крови будут подвергнуты анализу в Гданьском медицинском университете. Целью анализа будет определение уровня лактата в взятых пробах. Определение уровня лактата будет проводиться колориметрическим кинетическим методом, основанным на скорости реакции.

Субъекты опосредованно предоставят образец кала до и после периода вмешательства. Материал будет собран участниками в специальный стандартизированный контейнер. Образец стула будет взят дважды: перед тестированием и в конце вмешательства. Образцы стула будут немедленно заморожены и сохранены при температуре -80 градусов по Цельсию, а затем в тех же условиях доставлены на оценку в независимую лабораторию. Собранные образцы фекалий будут подвергнуты количественному и качественному составу кишечной микробиоты с использованием метода секвенирования нового поколения. Будут проанализированы выбранные гипервариабельные области гена 16SrRNA. Состав микробиома будет характеризоваться прежде всего альфа- и бета-разнообразием. Разнообразие микробных сообществ в одном образце (альфа) будет измеряться с использованием нескольких индикаторов, таких как Chao1, ACE, Шеннона и инвертированного Симпсона. Все показатели будут рассчитаны на основе необработанных данных NGS (без какой-либо предварительной обработки, т.е. удаление редких видов) и сравнивали опытную и контрольную группы с помощью стандартного статистического критерия в зависимости от распределения переменных. Разнообразие микробных сообществ между образцами (бета) будет измеряться с использованием индикатора различий (Брэя-Кертиса) и показателей расстояния (взвешенный UniFrac - показатель, основанный на филогенезе). Показатели сходства будут рассчитаны для всех пар выборок и сохранены в матрицах несходства. Брей-Кертис проведет перестановочный многомерный дисперсионный анализ (PERMANOVA) и взвешенные матрицы различий UniFrac для оценки различий на групповом уровне. Анализу бета-разнообразия будет предшествовать контролируемая и автоматическая предварительная обработка данных, такая как удаление редких видов и преобразование чисел с использованием медианной глубины секвенирования в качестве коэффициента масштабирования. Собранные образцы фекалий будут проанализированы на предмет наличия параметров кишечной проницаемости, таких как кальпротектин, зонулин и ИФАБП, а также продуктов бактериального метаболизма, таких как короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК).

Все полученные данные будут проанализированы с помощью статистической программы Statistica 13. В статистический анализ будут включены только полные данные от субъектов, которые завершили весь период вмешательства, а также все процедуры исследования. Данные будут предварительно проверены на нормальность с помощью W-критерия Шапиро-Уилка. В случае аномального распределения данных будут использоваться их натуральные логарифмы. Исследователи обычно используют описательную статистику для получения исходной информации, а также для изучения тенденций анализируемых параметров со средними значениями 95% доверительного интервала. В зависимости от нормальности базовых данных будут проводиться параметрические или непараметрические тесты. Статистическая значимость установлена ​​на уровне p < 0,05.